나노물질
산업 제조
올레아놀산은 화장품의 보조제로만 사용되어 왔습니다. 본 연구의 목적은 올레아놀산이 인간의 주름 개선을 위한 활성 성분인 효과를 보여주고 난용성 올레아놀산을 주름 개선용 화장품의 주성분으로 사용할 수 있도록 하는 고분자 미셀 제형을 개발하는 것입니다. . 올레아놀산의 용해도는 가용화제, 계면활성제 및 중합체에서 평가되었습니다. 올레아놀산을 함유한 고분자 미셀의 입자 크기와 모양을 전기영동 광산란 분광 광도계와 주사 전자 극저온 현미경으로 평가하였다. 캡슐화 효율 및 피부 투과성은 HPLC로 측정하였다. 40 ℃에서 3 개월간 보관한 고분자 미셀의 안정성은 육안 관찰, 입도 측정, 올레아놀산 함량 측정으로 평가하였다. 8 주 동안 23명의 여성 피험자의 눈 주위에 최종 제품 앰플 형태의 고분자 미셀을 도포했습니다. 5개의 피부 매개변수를 8 주 동안 4 주마다 광학 프로파일로메트리로 평가했습니다. 또한 전문가가 피부를 육안으로 관찰하여 인체 피부 자극 연구를 수행했습니다. Capryol 90® 및 poloxamer를 사용하여 100 nm 미만의 입자 크기를 갖는 올레아놀산의 고분자 미셀을 제조했습니다. 고분자 미셀에서 올레아놀산의 피부 투과율은 2가지 다른 계면활성제에 분산된 올레아놀산으로 만들어진 다른 용액에서보다 더 높았다. 입자 크기, 색상 또는 올레아놀산 함량의 유의한 변화는 관찰되지 않았으며 40°C에서 3개월 동안 보관된 고분자 미셀은 상 분리를 거치지 않았습니다. 도포 8 주 후에도 피부 자극이 발생하지 않았으며, 광학 프로파일로메트리로 평가한 5가지 지표와 시각적 평가 점수가 모두 유의하게 개선되었습니다. 본 연구는 본 연구에서 제조된 올레아놀산의 고분자 미셀이 주성분으로서 인간의 주름 개선에 안정적이고 효과적임을 보여주었다. 이러한 발견을 바탕으로 올레아놀산의 고분자 미셀이 화장품 분야에 널리 사용될 수 있을 것으로 기대된다.
피부 노화에는 처짐(느슨함), 가늘어짐, 주름이 포함됩니다. 감염, 흡연, 자외선, 외상, 호르몬 불균형, 스트레스 및/또는 엘라스티나제 또는 콜라게나제를 포함한 가수분해효소와 같은 산화촉진제에 의해 가속화될 수 있습니다[1]. 위에서 언급한 원인에 의해 생성된 활성산소나 활성산소는 주변 세포에 손상을 주어 피부의 탄력을 저하시키고 얇아지게 한다[2, 3]. 특히, 자외선은 세포막 지질, 세포 단백질, DNA를 손상시키는 활성산소의 생성을 유발하여 주름, 주근깨, 기미의 발현을 촉진시키는 것으로 알려져 있다[1,2,3,4]. 올레아놀산은 여러 식물 종에서 추출한 천연 식물 유래의 유효성분으로 주요 의료 및 미용 성분으로 사용됩니다. 사과나 배와 같은 과일에서도 발견됩니다[5]. 하이드록시 펜타사이클릭 테르펜의 일종으로 올레아놀산은 올리브(Olea europaea ) 잎이 있으며 동아시아 swertia(Eugenia jambos)를 포함한 식물에서 널리 발견됩니다. ) 및 황색 용담(용담속 ). 콜라겐 합성에 중요한 프로콜라겐 뿐만 아니라 세라마이드, 필라그린 등의 합성과 콜라겐과 같은 단백질을 분해하는 효소인 MMP-1의 활성을 억제하여 노화방지 기능을 촉진합니다. 5, 6]. 이러한 결과를 바탕으로 올레아놀산은 콜라겐 생성을 촉진할 뿐만 아니라 콜라겐 분해를 방지하여 이중 항노화 효과가 있다고 가정할 수 있다[7]. 결과적으로 올레아놀산은 화장품의 매우 유망한 노화 방지 성분입니다. 그러나 화장품에 올레아놀산을 주성분으로 사용하는 것은 수용성이 좋지 않아 한계가 있다. 따라서 유화 제형의 일부로 소량의 올레아놀산만 화장품의 보조 성분으로 사용되었습니다[8]. 피부 흡수와 관련된 물리화학적 특성에는 녹는점, 분자량, 분배계수, 친수성 등이 있습니다. 융점이 300 °C 이상으로 결정성이 높은 물질임을 나타냅니다. 고결정성 물질은 용해에 더 큰 에너지를 필요로 하고 제한된 용해도로 인해 낮은 생체이용률을 나타내므로 잘 흡수되지 않습니다[9]. 또한 친수성이나 친유성이 높은 화합물이나 고분자량의 화합물은 피부에 쉽게 침투하지 못하는 것으로 알려져 있다[10, 11]. 이러한 분자의 피부 투과성을 개선하기 위해 가장 흔히 사용되는 방법은 전구체의 합성 또는 콜로이드성 약물 담체의 사용이다. 이와 관련하여 리포솜, 에멀젼 및 고분자 미셀에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다[12].
고분자 미셀은 수용액에서 코어-쉘 구조를 형성하는 자기 조립 나노 규모의 집합체입니다. 고분자 미셀은 종종 소수성 내부 코어와 친수성 외부 쉘을 형성할 수 있는 이중 블록 또는 삼중 블록 공중합체로 만들어집니다[13, 14]. 고분자 미셀은 고분자 미셀의 특성이 블록 공중합체에서 고분자 단량체의 유형과 비율에 따라 달라지고 임계 미셀 농도가 상대적으로 낮기 때문에 계면활성제 미셀보다 물리적으로 더 안정적인 것으로 간주됩니다[15, 16].
본 연구에서는 올레아놀산의 고분자 미셀을 제조하고 그 입자 크기와 모양, 그리고 올레아놀산의 캡슐화 효율과 피부 투과율을 평가하였다. 이 형태의 올레아놀산의 물리적 안정성도 3 개월 동안 평가되었습니다. 실제 화장품 제형에서 올레아놀산의 인체 주름 개선 효과도 조사했다.
Oleanolic acid, Tween 80, Tween 20 및 Tween 60은 TCI(Tokyo, Japan)에서 구입했습니다. PEG 400, Pluronic F127 및 Pluronic F68은 BASF(독일 Ludwigshafen)에서 구입했습니다. 프로필렌 글리콜, PEG 300 및 PEG 200은 JUNSEI(Tokyo, Japan)에서 구입했습니다. TRANSCUTOL P, LABRASOL, LAUROGLYCOL FCC, LABRAFAC, Capryol® 90 및 Capryol™ PGMC는 Gattefossé(프랑스 리옹)에서 구입했습니다. 디소듐 EDTA(대중화학, 한국 시흥), 알란토인(Sigma Aldrich, St. Louis, MI, USA), 디프로필렌글리콜(대중화학, 한국, 시흥), 프로판디올(DuPont Tate &Lyle Bio Products Company, LLC, Loudon, USA), 카보머(The Lubrizol Corporation, Ohio, USA) PEG/PPG/폴리부틸렌 글리콜-8/5/3 글리세린(NOF Corporation, Tokyo, Japan), 나트륨 히알루론산(TCI, Tokyo, Japan), 베타글루칸(SK Bioland, 천안, 한국), 페녹시에탄올(대중화학, 시흥, 한국), 카프릴릴글리콜(J TWO K BIO CO., Ltd. , 청주, 한국) 및 에틸헥실글리세린(제이투케이바이오(주), 청주, 한국)을 사용하여 올레아놀산 함유 화장품을 제조하였다. HPLC 등급 아세토니트릴은 Burdick &Jackson(Muskegon, MI, USA)에서 입수했습니다. 삼중증류수를 사용하였으며, 기타 용매 및 시약은 EP, GR 등급을 사용하였다. Crlori:SKH1-hr 털이 없는 암컷 마우스는 OrientBio(한국 성남)에서 구입했습니다.
올레아놀산은 Shimadzu LC-30 시리즈 HPLC(Shimadzu Corporation, Kyoto, Japan)를 사용하여 분석되었습니다. 주변 온도에서 Kromasil 100 C18 250 mm × 4.6 mm, 5 μm, 분석 컬럼(Teknokroma, Barcelona, Spain)을 사용했습니다. 이동상은 아세토니트릴과 물(85:15, v/v)로 이루어졌으며 유속은 1 mL/min, 주입량은 10 μL입니다. 올레아놀산은 UV λ에서 분석되었습니다. =210 nm. 모든 측정은 주변 온도에서 수행되었습니다[17].
측정된 양의 올레아놀산을 가용화제에 넣고 60℃에서 48시간 동안 교반한 후 초음파 세척기를 이용하여 5분 동안 초음파 처리하였다. 현탁액을 Universal 320R 원심분리기(Hettich, Tuttlingen, Germany)를 사용하여 2000 rpm에서 원심분리한 후 상층액을 모았다. 그런 다음 상층액을 0.45 μm PVDF 멤브레인 필터(Whatman, Kent, UK)를 통해 여과했습니다. 해당 가용화제에 대한 올레아놀산의 용해도는 올레아놀산과 가용화제의 초기 중량의 합에서 잔류 고형물의 중량을 빼서 추정되었습니다(표 1).
제형 최적화 연구는 폴록사머 188, 폴록사머 407, 트윈 60 및 트윈 80을 사용하여 수행되었습니다. 표 2에 요약된 바와 같이 양친매성 중합체 및 계면활성제의 다양한 비율을 시도했습니다. 각각의 올레아놀산 및 Capryol® 90을 칭량하고, 가열하고, 교반했습니다. 투명한 용액이 관찰될 때까지 60 °C 이상에서. 이어서, 표 2에 나타낸 중합체/계면활성제를 투명한 용액에 첨가하고 투명한 용액이 관찰될 때까지 60℃ 이상에서 교반하였다. 그런 다음 용액을 증류수에 분산시켰다(그림 1). 생성된 용액을 약 48시간 동안 방치한 후 육안 검사를 통해 최적의 제형을 선택했습니다. 침전, 상분리, 투명도 및 겔화 관찰을 포함하여 표 2의 각 제형에 대한 육안 검사 결과는 표 3에 요약되어 있다.
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올레아놀산 미셀 준비의 개략도
올레아놀산(PMO)의 고분자 미셀은 도 1에 나타낸 방법을 사용하여 표 2의 제형 G 및 H를 사용하여 제조되었습니다. PMO-G 및 PMO-H는 후속 실험에 사용되었고 PMO-H는 화장품에 사용되었습니다. 임상 시험.
제형 G 또는 제형 H가 물에 분산되었을 때의 고분자 미셀화는 육안 관찰, 즉 투명도에 의해 확인되었다. PMO 형성(PMO-G 또는 PMO-H)도 염색 테스트에 의해 확인되었다. 물과 Capryol® 90, 물, Capryol® 90, PMO-G, PMO-H의 혼합물에 Methylene blue를 첨가하여 용액의 색을 육안으로 관찰하고 사진으로 촬영하였다.
ELS(전기영동 광산란) 기술은 입자가 잘 정의된 전기장에서 무작위 브라운 운동과 방향성 전기영동 운동을 모두 나타낼 때 시간의 함수로 입자의 산란 강도 변동을 측정합니다. 입자 전기영동 이동도는 ELS 기술[18]에 의해 측정되며 전기영동 광산란 분광광도계(ELS-Z, Photoal, Otsuka Electronics, Japan)를 사용하여 PMO-G 및 PMO-H의 입자 크기를 평가할 수 있습니다.
극저온 주사 전자 현미경 또는 주사 전자 극저온 현미경(cryo-SEM)은 콜로이드 중합체 현탁액 또는 분산액이 급속 동결에 의해 고정되고 이미징을 위해 골절된 후 미세 구조 또는 나노 구조의 상태를 시각화하는 강력한 기술입니다. 균열은 액체 질소의 정상적인 끓는점인 − 196 °C에서 만들어지고 벌크 및 완전히 유착된 입자의 유리 전이 온도보다 훨씬 낮습니다. Cryo-SEM 이미지는 얼음을 통해 전파되는 골절에 대한 입자의 다양한 반응을 보여줍니다[19]. 주사 전자 극저온 현미경(Tescan Mira 3 LMU FEG/Quorum Technologies PP3000T Cryo-SEM 샘플 준비 시스템)을 사용하여 PMO의 모양을 관찰했습니다.
올레아놀산 고분자 미셀의 캡슐화 효율을 평가하였다. PMO를 2000 rpm에서 15분 동안 원심분리하고 상층액을 모아 HPLC로 분석하였다. 캡슐화 효율은 고분자 미셀에 있는 올레아놀산의 양을 PMO 준비 동안 처음에 첨가된 올레아놀산의 양(mg)으로 나눈 값으로 계산되었습니다.
$$ \mathrm{Encapsulation}\ \mathrm{효율}\ \left(\%\right)=\kern0.37em \frac{\mathrm{Amount}\ \mathrm{of}\ \mathrm{oleanolic}\ \mathrm {acid}\ \mathrm{in}\ \mathrm{고분자}\ \mathrm{micelle}\ \left(\mathrm{mg}\right)}{\mathrm{Amount}\ \mathrm{of}\ \mathrm{ oleanolic}\ \mathrm{산}\ \mathrm{in}\mathrm{최초}\ \mathrm{추가}\ \left(\mathrm{mg}\right)}\times 100 $$PMO-H의 물리적 안정성은 40 °C에서 3 개월간 보관하여 평가하였다. 색상 변화, 상 분리, 침전물의 존재 및 탁도 변화를 육안으로 평가하였다. 일정한 시간 간격으로 채취한 PMO-H 샘플을 HPLC로 분석하여 남은 올레아놀산의 양을 결정하고 ELS-Z로 분석하여 PMO-H 입자 크기를 결정했습니다. 결과는 그림 9에 나와 있습니다.
올레아놀산의 피부 투과 향상을 조사하기 위해 Franz 확산 셀을 사용하여 체외 피부 투과 연구를 수행했습니다. 시험은 증류수에 분산된 올레아놀산과 트윈 80의 혼합물, 증류수에 분산된 올레아놀산과 프로필렌글리콜의 혼합물인 PMO-G, PMO-H에 대해 수행하였다. 생후 6주된 암컷 무모 마우스의 피부를 필요한 크기로 절단하였다. 수직 Franz 세포를 사용하였고 피부는 각질층이 위를 향하도록 두 챔버 사이에 고정되었습니다. 선택한 제형 330㎕를 피부에 바르고 프란츠 세포를 파라필름으로 덮었습니다. 수용체는 PBS 용액(pH 7.4)과 에탄올을 9:1(v/v) 비율로 채웠습니다. 리셉터 용액은 샘플링 시간마다 새로운 PBS 용액으로 다시 채웠습니다. 샘플을 2, 4, 6, 8, 10, 20 및 24시간에 회수하고 HPLC로 분석했습니다. 24시간 후, 피부에 남아있는 과잉 제형은 Kimwipes(Kimberly-Clark professional, NSW, Australia)로 제거되었습니다. 투과 연구에 사용된 피부를 PBS 용액으로 세척하고 피부에 남아있는 올레아놀산을 HPLC로 측정하였다. 모든 투과 실험은 삼중으로 수행되었습니다.
실험은 독립적으로 3회 반복하였으며, 본 연구의 결과는 평균 ± SD로 보고하였다. 통계 분석은 독립적인 t에 의해 검증되었습니다. 테스트 및 p 값 <0.05는 통계적으로 유의한 것으로 간주되었습니다.
임상시험은 시험제품으로 PMO-H를 사용하였다. PMO-H, 정제수, 디소듐 EDTA, 알란토인, 디프로필렌글리콜, 프로판디올, 카보머, PEG/PPG/폴리부틸렌글리콜-8/5/3 글리세린을 넣고 마그네틱 스터러를 이용하여 10~15분 교반 후 포타슘 수산화물을 첨가하고 혼합물을 5~10분 동안 더 교반하였다. 성분이 균일하게 혼합되면 히알루론산나트륨과 베타글루칸을 첨가하여 2~5분 더 교반한 후 페녹시에탄올, 프로판디올, 카프릴릴글리콜, 에틸헥실글리세린을 가하여 2~5분 동안 교반하였다. 최종 포뮬라를 앰플에 시험 제품으로 첨가하였다. 앰플 기포는 시험 사용 전 진공 건조 오븐을 이용하여 제거하였다. 올레아놀산을 제외한 것을 제외하고는 시험제품과 동일한 방법으로 대조군을 제조하였다.
앰플에 PMO-H가 함유된 화장품의 피부 패치 테스트는 인체 피부 자극 테스트에 참여하기로 동의한 22~56세의 남녀 25명을 대상으로 진행됐다. 각 시험물질을 상완에 떨어뜨리고 패치로 고정하였다. 24시간 동안 패치를 부착하였으며, 패치 제거 후 30 분, 24 h, 48 h 전문가 2명이 ICDRG(International Contact Dermatitis Research Group)의 기준에 따라 자극 정도를 관찰하였다.
주름개선 시험에 참여하기로 동의한 30~65세 여성 23명의 눈 주위에 올레아놀산을 최종 제품 형태로 함유한 고분자 미셀을 앰플에 도포하였다. 피험자는 포함 기준을 충족하고 제외 기준을 충족하지 않았으며 인간 적용 테스트에 참여하기로 동의했습니다. 이중 맹검법은 연구자와 피실험자 모두가 따랐다. 시험은 8 주 동안 실시하였고, 평가는 4 주마다 실시하였다. 이중 맹검법과 무작위 할당이 사용되었습니다. 시험 제품과 대조군은 동일한 피험자의 얼굴의 왼쪽 또는 오른쪽에 무작위로 따로따로 도포하였다. 5개의 매개변수는 Skin Visiometer SV 700(Courage + Khazaka electronic GmbH, Cologne, Germany)을 사용하여 8주 동안 4주마다 광학 프로파일로메트리로 평가되었습니다. 평균 거칠기(R3)가 1차 평가변수이고 4개 매개변수가 피부 거칠기(R1)입니다. , 최대 거칠기(R2), 평활도 깊이(R4) 및 산술 평균 거칠기(R5)가 2차 종료점이었습니다. 피험자의 동일 부위에 대한 5가지 매개변수의 증가 또는 감소를 시간 경과에 따라 측정하고, 5가지 매개변수의 증가 또는 감소의 평균값을 계산하여 대조군 및 시험 제품 처리 사이에 비교하였다. 또한 전문가가 피부를 육안으로 관찰했습니다. 눈가 주름 사진은 Janus 1 Mark II(PIE Co., Ltd., Suwon, Korea)를 사용하여 촬영하였다. 시각적 평가 점수를 결정하는 데 사용된 기준은 그림 S1에 표시되고 시각적 결과는 그림 13에 표시됩니다. 매개변수는 paired-samples t를 사용하여 비교 및 분석되었습니다. 95%의 신뢰도에서 테스트 [20,21,22,23,24,25].
생체 적합성 가용화제, 특히 계면활성제 및 중합체에 대한 올레아놀산의 용해도는 표 1에 나와 있습니다. 올레아놀산은 친수성-친유성 균형(HLB)이 낮은 소수성 오일에 용해되는 경향이 있습니다. Capryol® 90은 일반 오일에 비해 HLB 값이 약간 더 높습니다[26]. 그러나 올레아놀산은 Capryol® 90에서 상대적으로 높은 용해도를 나타냅니다. 또한 Capryol® 90은 미셀의 내부 코어로 쉽게 안정화될 수 있습니다[27]. Capryol® 90을 선택한 후 올레아놀산 미셀의 껍질 부분에 대해 여러 유형의 계면활성제 또는 폴록사머를 스크리닝했습니다[27,28,29,30]. 표 2에 나타낸 올레아놀산 미셀 조성은 증류수로 희석한 직후에 투명한 조성이다. 그러나 일부 조성은 불안정하여 24시간 이내에 침전, 상 분리 또는 겔화를 겪었습니다. 침전, 상 분리, 투명한 액체 및 겔 상태의 대표적인 이미지가 그림 2에 나와 있습니다. 각 공식의 최종 상태는 표 3에 요약되어 있습니다. 조성물 G 및 H는 24시간 후에도 투명하게 유지되었습니다. 비록 구성은 맑았지만, 그것은 액체라기 보다는 젤이었다. 조성물 A 내지 D는 24 h 후 침전으로 불투명하게 변하였다. 이러한 결과를 감안할 때 추가 개발을 위해 G 및 H 구성이 선택되었습니다.
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a의 대표 이미지 강수량, b 상 분리, c 투명한 액체, d 올레아놀산 미셀의 겔화
올레아놀산의 고분자 미셀의 구조를 염색 시험으로 조사하였다. 그림 3은 Capryol® 90과 증류수, Capryol® 90, 증류수의 혼합물, 그리고 메틸렌 블루를 해결책. Capryol® 90과 증류수의 혼합물에 대해 명확한 상 분리가 발생했습니다. Capryol® 90의 경우 메틸렌 블루의 침전이 관찰되었습니다. 메틸렌 블루를 첨가한 후 증류수는 진한 파란색으로 변했습니다. PMO-G 및 PMO-H도 파란색으로 변하여 고분자 미셀이 유상 내부 코어와 수상 외부 쉘로 구성되었음을 나타냅니다. 즉, 조성 G와 H의 양친매성 고분자인 폴록사머 407은 외부 껍질 역할을 하며 올레아놀산을 함유한 Capryol® 90의 내부 코어를 캡슐화하여 올레아놀산의 고분자 미셀을 성공적으로 형성하는 데 도움이 됩니다[31].
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메틸렌 블루를 사용한 염색 테스트:(a ) Capryol® 90과 증류수의 혼합물, (b ) Capryol® 90, (c ) 증류수, (d ) PMO-G 및 (e ) PMO-H
입자 크기, 크기 분포 및 모양은 미셀 제형의 물리적 안정성을 예측하는 좋은 지표가 될 수 있습니다. PMO-G의 평균 입자 크기는 80.4 nm이었고, PMO-H의 평균 입자 크기는 57 nm였다(Fig. 4). PMO-A, G, H의 히스토그램은 위상 상태에 의해 영향을 받는 크기 분포를 비교하기 위해 그림 5에 나와 있습니다. 표 3에서 보는 바와 같이 PMO-A는 침전으로 인해 불투명하고 PMO-G와 H는 투명하다. PMO-A의 입자 크기는 100 nm 이상이며, PMO-A는 PMO-G 및 H보다 넓은 크기 분포를 나타냅니다(그림 5). PMO-H는 PMO-G보다 입도 분포가 좁고 화장품에 적합한 유동성을 나타낸다.
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표 2의 PMO-G 및 PMO-H 평균 입자 크기:80.4 ± 11.1 nm(PMO-G) 및 57 ± 5.24 nm(PMO-H)
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세 가지 다른 PMO 샘플의 입자 분석 히스토그램. 아 PMO-A, 121.28 nm; ㄴ PMO-G, 80.4 nm; 그리고 (c ) PMO-H, 57 nm
PMO-G와 PMO-H의 캡슐화 효율은 모두 99~100%로 PMO의 내부 코어에 올레아놀산이 거의 100% 캡슐화되었음을 나타냅니다(그림 6).
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약 100%에 가까운 약물 캡슐화 효율을 나타내는 PMO-G 및 PMO-H의 캡슐화 효능:98.26 ± 0.17%(PMO-G) 및 99.18 ± 1.06%(PMO-H)
PMO-G와 PMO-H의 형태는 주사전자현미경(Cryo-SEM)으로 조사하였다. Cryo-SEM은 PMO-G와 PMO-H가 모두 구형 고분자 미셀임을 보여주었다. 그러나 PMO-H 고분자 미셀은 PMO-G 고분자 미셀보다 크기와 모양이 더 일관성이 있었다(그림 7).
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a의 주사 전자 극저온 현미경 이미지 PMO-G 및 b PMO-H
6주령의 털이 없는 암컷 생쥐의 피부를 이용하여 시간에 따른 피부에 남아있는 총 올레아놀산의 양과 피부를 투과한 올레아놀산의 총량을 시간에 따라 측정하였다. PMO-G, PMO-H, 증류수에 분산된 올레아놀산과 트윈 80의 혼합물(OTw), 증류수에 분산된 올레아놀산과 프로필렌글리콜의 혼합물(OPG)의 4가지 제형을 피부 측면에서 비교했습니다. 올레아놀산의 투과 효율. 24시간 후 피부를 통해 투과된 올레아놀산의 총량은 PMO-H 29.49 ± 4.00%, PMO-G 21.39 ± 5.91%, OTw 13.66 ± 0.81%, OPG 5.90 ± 2.47%였습니다. 그림 7에서 보는 바와 같이 PMO-G와 PMO-H의 경우 8 h에서 올레아놀산의 첫 번째 검출이 가능했고, OTw에서 올레아놀산의 첫 번째 검출은 10 h에서, OPG는 20 h에서 가능했다. 시간. 피부에 남은 올레아놀산의 비율은 PMO-H 56.22±13.50%, PMO-G 36.74±0.72%, OTw 27.44±7.02%, OPG 26.28±5.42%였다. PMO-H는 피부를 통해 투과된 올레아놀산과 피부에 남아있는 올레아놀산 모두 가장 많은 양을 나타냈다(Fig. 8). 이러한 결과는 PMO가 미셀을 형성하지 않는 제형보다 더 빠르고 더 많이 침투할 수 있음을 나타냅니다.
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증류수에 분산된 PMO-G, PMO-H, oleanolic acid, Tween 80 혼합물의 oleanolic acid의 총량(Otw)과 피부를 통해 투과된 oleanolic acid와 propylene glycol 혼합물의 증류수(OPG)에 분산되어 피부를 투과한 oleanolic의 양 시간의 함수로서 각 제형의 산. 24시간 후 피부에 남아있는 올레아놀산의 양:36.74 ± 0.72%(PMO-G), 56.22 ± 13.50%(PMO-H), 27.44 ± 7.02%(Otw), 26.28 ± 5.42%(OPG) 24 h 후 투과된 올레아놀산의 양:21.39 ± 5.91%(PMO-G), 29.49 ± 4.00%(PMO-H), 13.66 ± 0.81%(Otw) 및 5.90 ± 2.67%(OPG)
특성화 및 체외 투과 연구를 기반으로 PMO-H가 앰플 제조를 위해 최종적으로 선택되었습니다. 앰플 제조 전 ONM-H의 안정성을 평가하였다. 안정성 연구를 위해 PMO-H는 가속 안정성 연구 조건에서 40 °C/75% RH에서 3 개월 동안 바이알에 보관되었습니다. 그런 다음 침전, 상 분리, 색상 변화 및 투명도를 시각적으로 평가했습니다. 그런 다음 HPLC를 사용하여 올레아놀산의 비율을 측정하고 입자 크기의 변화도 확인했습니다. 시간이 지남에 따라 안정성을 확인했습니다. PMO-H는 침전이나 상분리 없이 투명하게 유지되었으며 가속안정성 조건하에서 3 개월 동안 색이 변하지 않았다. HPLC로 측정한 올레아놀산의 비율과 시간에 따른 입도 변화를 Fig. 9에 나타내었다. 올레아놀산 비율은 98% 이상을 유지하였고, 49.6 ± 5 nm의 입도는 안정 3개월 동안 거의 일정하게 유지되었다. 교육 기간. 이러한 결과는 PMO-H가 가속 안정성 조건에서 3 개월 동안 물리적, 화학적으로 안정함을 보여줍니다.
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PMO-H 40 °C/75% RH 가속 조건에서 3 개월의 안정성 시험 동안 PMO-H의 함량 및 입자 크기 변화. PMO-H에서 올레아놀산의 비율:100 ± 1.6%(0 month), 99.9 ± 0.2%(1 month), 99.5 ± 0.2%(2 month) 및 99.3 ± 0.2%(3 month). PMO-H의 입자 크기:55.3 ± 6.5 nm(0 months), 54.6 ± 7 nm(1 month), 51.0 ± 5.56 nm(2 months), 49.6 ± 5 nm(3 months)
임상시험에 앞서 22~56세의 건강한 남녀 지원자 25명을 대상으로 인체 자극성 시험을 실시하였다. 시험 제품을 피험자의 상완에 24시간 동안 패치한 후 패치 제거 후 30분, 24시간, 48시간 후 피부 자극 지수를 측정하였다. PMO-H 함유 화장품 앰플 제형은 패치 제거 후 1 h 또는 48 h에서 자극이 관찰되지 않았습니다.
임상 시험은 눈가에 주름이 있는 30~65세 여성 23명을 대상으로 진행되었습니다. 탈락자 3명을 제외하고 20명이 시험제품, PMO-H 앰플, 대조군을 각각 얼굴의 왼쪽 또는 오른쪽에 각각 8주 동안 도포하여 시험을 완료하였다. 피부 변화는 5가지 매개변수에 따라 평가되었습니다. 1차 평가변수인 평균 거칠기(R3), 2차 평가변수로 4개의 추가 매개변수, 즉 피부 거칠기(R1), 최대 거칠기(R2), 매끄러움 깊이(R4) 및 산술 평균 거칠기 (R5). 시각적 평가 점수는 추가적인 2차 평가변수를 추가했습니다. 결과는 표 4에 요약되어 있습니다.
1차 평가변수 R3는 테스트 제품 사용 4 주 후 0.673% 감소했으며 8주 사용 후 통계적으로 유의하게 7.835% 감소했습니다(p =0.006). 대조군 적용으로 R3는 4주 사용 후 5.127% 증가했으며 8주 사용 후 통계적으로 유의하게 9.971% 증가했습니다(p =0.010). The difference in R3 value between the areas treated by the test product and those treated by the control was statistically significant after 8 weeks of use (p =0.000) but not statistically significant after 4 weeks of use, perhaps due to inter-subject variation (Fig. 10).
Changes in primary endpoint value, R3, before, after 4 weeks use, and after 8 weeks use of an ampoule containing polymeric micelles of oleanolic acid and the control during clinical trial. R3 value of test product use:0.094 ± 0.023 before use, 0.093 ± 0.023 after 4 weeks use, 0.086 ± 0.020 after 8 weeks use. R3 value of control product:0.087 ± 0.023 before use, 0.091 ± 0.025 after 4 weeks use, 0.095 ± 0.024 after 8 weeks use (A.U. for arbitrary unit). * 1 The wrinkle analysis of R3 value decreased statistically significantly. * 2 The wrinkle analysis of R3 value increased statistically significantly
The analysis of the secondary endpoint R1 showed that the value had decreased by 4.629% after 4 weeks of test product use and statistically significantly by 9.973% after 8 weeks of use (p =0.017). With control application, R1 had increased by 8.037% after 4 weeks of use and 4.799% after 8 weeks of use. The difference in R1 values between the areas using the test product and the control was not statistically significant after 4 weeks of use but was after 8 weeks of use (p =0.024). The secondary endpoint R2 had decreased by 1.048% after 4 weeks of test product use and 5.803% after 8 weeks. With control application, it had increased by 7.261% after 4 weeks and 9.536% after 8 weeks. The difference in R2 value between the areas treated by the test product and those treated by the control was statistically significant after 8 weeks of use (p =0.016) but not after 4 weeks of use. The secondary endpoint R4 had significantly decreased by 8.594% (p =0.039) after 4 weeks of test product use and by 9.747% after 8 weeks of use. With the control, R4 had increased by 10.764% after 4 weeks of use and 3.491% after 8 weeks of use. Interestingly, the difference in R4 value between the areas using the test product and the control was statistically significant after 4 weeks of use (p =0.008) but not after 8 weeks. The secondary endpoint R5 had decreased by 6.333% after 4 weeks of test product use and 8.556% after 8 weeks of use. The difference in R5 value between the areas of using the test product and the control was not statistically significant following 4 weeks or even 8 weeks of use.
The analysis of the further secondary endpoint, the visual evaluation of wrinkles, showed that the visual evaluation score had decreased by 2.917% after 4 weeks of test product use and statistically significantly decreased by 8.333% after 8 weeks of use (p =0.034). With application of the control, the visual evaluation score had increased by 1.667% after 4 weeks and 4.167% after 8 weeks. The difference of the visual evaluation score between the areas treated by the test product and by the control was statistically significant after 8 weeks of use (p =0.046) but not after 4.
In summary, the analysis of the wrinkled area around the eyes showed that the difference in the primary endpoint value R3 between the areas treated by the test product and by the control was statistically significant after 8 weeks of use. In terms of the secondary endpoints, all values had decreased after test product use and increased after control use. The difference in R4 values between the areas treated by the test product and those treated by the control was statistically significant after 4 weeks of use, but the difference of the R1 and R2 values were statistically significant only after 8 weeks of use (Fig. 11). The visual evaluation score by professionals showed that all the average visual evaluation scores for wrinkles had decreased after 4 weeks and 8 weeks of test product treatment compared to the control (Table 5). The difference in the visual evaluation score between the areas treated by the test product and by the control was statistically significant after 8 weeks of use (Fig. 12). Overall, according to all endpoints, the cosmetics formula containing PMO-H as a primary ingredient was found to help improve wrinkles after 8 weeks of use (Fig. 13).
Results of secondary endpoint R1, R2, R4, and R5 for skin wrinkle measurement—before use, after 4 weeks use, and after 8 weeks use of the test product and the control. Please refer to Table 4 for the exact values (A.U. for arbitrary unit)
Results of visual evaluation of skin—before use, after 4 weeks use, and after 8 weeks use of the test product and the control. Test product:3.050 ± 0.887 before use, 2.95 ± 0.999 after 4 weeks use, and 2.75 ± 0.851 after 8 weeks. Control product:2.900 ± 0.887 before use, 2.95 ± 0.945 after 4 weeks use, and 3.000 ± 0.918 after 8 weeks use. * 1 The visual evaluation grade of wrinkles by professionals decreased significantly. * 2 The visual evaluation grade of wrinkles by professionals increased significantly
Pictures of the tested areas
Surfactants are commonly used excipients in cosmetic products to improve solubility of poorly soluble materials. One caveat would be the amount included in the product. Surfactants should be added in sufficient amount to dissolve poorly soluble materials without precipitation. Only a minimal amount should be added for safety reasons. Micelle formulation could be the solution to this problem. Polymeric micelles of oleanolic acid developed in this study improve the solubility of oleanolic acid with a minimum amount of surfactants and enhance the permeation of oleanolic acid through the skin. Stable polymeric micelles of oleanolic acid were developed using Capryol 90 and poloxamer. The polymeric micelles of oleanolic acid developed in this study were stable, that is, they did not show any precipitation, phase separation, or degradation at 40 °C after 3 months. The clinical trial showed that, as a main active ingredient, the oleanolic acid in the polymeric micelle formulation is effective for alleviating human wrinkles. Based on these findings, it can be concluded that oleanolic acid, which is poorly soluble in water and therefore, unusable in a native form as a principal ingredient for alleviating skin wrinkles, can be formulated into applicable polymeric micelles. Furthermore, it is expected that the polymeric micelles of oleanolic acid developed in this study will prove very useful for alleviating human wrinkles and will prove widely applicable to cosmetic applications.
Not applicable
Polymeric micelles of oleanolic acid
폴리에틸렌 글리콜
Highly purified diethylene glycol monoethyl ether
PEG-8 Caprylic/Capric Glycerides
Propylene glycol monolaurate (type I, monoesters>45%)
Caprylic/Capric Triglyceride
Propylene glycol monocaprylate (type II, monoesters>90%)
Propylene glycol monocaprylate (type I, monoesters>55%)
Ethylenediaminetetraacetic Acid
Electrophoretic light scattering
나노물질
철광석 응집 과정과 역사적 발전 개발된 응집 공정에는 네 가지 유형이 있습니다(그림 1). (i) 연탄화, (ii) 결절화, (iii) 소결 및 (iv) 펠릿화입니다. 그림 1 응집 과정 Briquetting은 가장 간단하고 가장 초기에 적용되는 공정입니다. 미세한 입자의 철광석은 높은 기계적 압축 압력 하에서 물이나 기타 바인더를 추가하여 베개 모양의 연탄에 압착됩니다. 구상화 공정에서는 미분 또는 정광이 탄소질 물질과 함께 가스 또는 오일로 가열된 경사 회전 가마를 통과합니다. 가마 내부의 온도는 연화하기에 충분하지만
소개: EV 배터리 또는 전기 자동차 배터리는 전기 자동차용으로 제작된 배터리 시스템입니다. 전기 자동차는 새로운 것이 아닙니다. 우리는 이미 전기 모터와 해당 인프라를 구축했는데 무엇이 부족합니까? 그들이 세상을 정복하지 못한 이유는 무엇입니까? 그 이유는 배터리 때문입니다. EV 배터리 시스템이라고 하는 것이 더 정확할 것입니다. 이 기사에서는 EV 배터리 시스템의 기본 사항과 요구 사항에 대해 설명합니다. 배터리를 생각할 때 가장 먼저 머리에 떠오르는 것은 아마도 소형 전기 기기에서 사용하는 2셀 배터리 또는 Androi