금 코팅과 아르곤 플라즈마 처리를 통한 폴리에테르에테르케톤(PEEK) 표면의 세포 부착 향상
초록
폴리에테르에테르케톤(PEEK)은 생체의료용 임플란트에 적합한 뛰어난 화학적 안정성과 생체역학적 호환성을 제공하지만, 소수성이며 생체 불활성인 표면이 세포 부착을 저해한다. 본 연구에서는 아르곤 플라즈마 활성화와 금 스퍼터 코팅의 시너지 효과를 탐구하여 마우스 배아 섬유아세포의 부착과 확산을 촉진하는 나노구조 인터페이스를 구축하였다. 표면 특성(극성, 화학성, 지형)은 중량 분석, 고니오메트리, X-선 광전자 분광법(XPS), 전기동력학적 분석, 원자력 현미경(AFM)으로 정량화하였다. 세포 반응은 부착 분석, 형광 이미징, 주사 전자 현미경(SEM)으로 평가하였다. 결과에 따르면 플라즈마 노출은 극성 기를 생성하고 표면 산소를 증가시키며, 금 증착은 추가로 습윤성을 향상시키고 나노구조 금속 층을 도입한다. 특히 금 코팅 두께가 세포 부착 향상과 직접적인 상관관계를 보이며, 150~300초 증착의 연속 금 층이 섬유아세포 증식에 가장 유리한 환경을 제공한다. 이 결과는 정형외과 및 척추 임플란트 응용에서 PEEK의 생물학적 성능을 개선하기 위한 플라즈마-금 복합 접근법의 타당성을 뒷받침한다.
배경
연령 관련 관절 퇴행은 골절, 관절염, 골종양을 유발하여 신뢰할 수 있는 정형외과 임플란트 수요를 증가시킨다. 티타늄 및 코발트-크롬 합금 같은 전통적 금속 합금은 강도와 내식성으로 선호되지만, 높은 탄성률로 인한 스트레스 실딩과 후속 골흡수 문제가 있다. UHMWPE, PTFE, PMMA, PLA, PGA, PHB 등 폴리머 대안은 널리 사용되지만 일반적으로 하중 지지 응용에 필요한 기계적 견고성이 부족하다. 반결정성 방향족 열가소성 수지인 PEEK는 피질골과 유사한 탄성률, 우수한 화학적/열적 안정성, 입증된 생체적합성으로 이 간극을 메운다. 그러나 본질적인 소수성과 생체 불활성으로 단백질 흡착과 세포 부착이 제한되어 표면 개질 전략이 필요하다.
표면 개질은 플라즈마 활성화나 금속 스퍼터링으로 달성할 수 있다. 플라즈마 처리는 벌크 특성을 손상시키지 않으면서 표면 화학을 변화시키는 반응성 종을 도입하고, 금 스퍼터링은 세포 부착을 향상시키고 추가 기능화 플랫폼 역할을 하는 생물학적으로 활성인 층을 제공한다. 특히 100 nm 미만 금 나노입자는 세포 부착과 증식을 촉진하는 것으로 알려져 있다. 본 연구는 아르곤 플라즈마 활성화와 금 스퍼터 코팅의 결합으로 섬유아세포 성장에 최적화된 나노구조 PEEK 표면을 제작하고, 척추 및 정형외과 임플란트 시사점을 탐구한다.
방법
재료 및 표면 개질
PEEK 포일(두께 50 µm, 밀도 1.26 g/cm3)을 Goodfellow Ltd.에서 구입하였다. 지름 2 cm 시료 각각을 아르곤 플라즈마(Balzers SCD 050)에 60초 또는 240초, 8.3 W로 노출시켰다. 이후 각 시료의 절반을 DC 아르곤 플라즈마 스퍼터링(전류 40 mA, 15 W)으로 30초, 150초, 300초 동안 금 코팅하여 30~300초 증착 시간의 금 층을 형성하였다. 시료는 24°C, 40~60% 습도에서 보관하였다.
표면 특성 분석
중량 분석
금 두께는 금의 벌크 밀도를 이용해 Mettler Toledo UMX2 마이크로밸런스로 측정한 질량 증가량으로 정량화하였다. 조건당 10회 반복 측정으로 15% 미만의 측정 오차를 보였다.
물 접촉각
습윤성은 Drop Shape Analysis System DSA 100으로 측정하였다. 14일 숙성된 시료에 2 µL 방울을 떨어뜨리고 2초 후 접촉각을 기록하였다. 각 시료를 3개 반복으로 최소 7회 측정하여 평균 ± 표준편차를 보고하였다.
X-선 광전자 분광법(XPS)
XPS 스펙트럼은 Omicron ESCAProbeP 분광기로 획득하였다. 2×3 mm2 영역을 초고진공 하에서 분석하며 C 1s, O 1s, Au 4f 피크에 초점을 맞췄다. 시료당 3회 독립 측정으로 10% 미만 오차.
제타 전위
전기동력학적 전위는 1 mM KCl과 인산염 완충 식염수(PBS, pH 7.4)에서 Anton Paar SurPASS로 측정하였다. 20×10 mm2 필름 쌍을 100 µm 간격 셀에 배치하였다. 스트리밍 전류를 시료당 3회 기록하고 Helmholtz-Smoluchowski 방정식을 적용하였다. 모든 측정은 14일 숙성 시료로 수행하였다.
원자력 현미경(AFM)
AFM 이미징(Bruker VEECO CP II)은 RTESPA-CP 프로브로 태핑 모드에서 1×1 µm2 영역의 표면 형태를 드러냈다. 다중 스캔으로 재현성 확인. 시료는 14일 숙성.
유도 결합 플라즈마 질량 분석법(ICP-MS)
PBS(pH 7.4)로 용출된 금은 ICP-MS(Agilent 8800)로 정량화하였다. 시료를 37°C, 5% CO2 가습 환경에서 6, 24, 72시간 배양하였다. 용출액을 1:8로 희석하여 3% 미만 불확도로 분석하였다.
세포 배양 및 세포적합성 시험
마우스 배아 섬유아세포(L929)를 DMEM에 10% FBS, 2 mM L-글루타민으로 37°C, 5% CO2에서 배양하였다. 멸균된 PEEK 디스크를 12-웰 플레이트에 장착하고 웰당 30,000 세포를 파종하였다. 세포 부착은 6시간, 증식은 24시간과 72시간에 평가하였다. 실험은 3회 반복 수행하였다.
형광 현미경
배양 후 세포를 4% 포름알데히드로 고정하고 F-액틴(팔로이딘-Atto 565)과 핵(DAPI)으로 염색하여 이미징하였다. 이미지는 14일 숙성 시료에서 획득하였다.
주사 전자 현미경(SEM)
SEM(Tescan LYRA3 GMU) 2차 전자 모드로 순수 PEEK, 플라즈마 처리/금 코팅 PEEK, 커버슬립(대조군)의 세포 형태를 시각화하였다. 세포를 Karnovsky 용액으로 고정하고 단계적 에탄올로 탈수 후 10 nm 금 코팅하고 10 µm 스케일 바에서 이미징하였다.
결과 및 논의
모든 분석은 플라즈마 및 금 증착 후 안정화된 표면 상태를 포착하기 위해 14일 숙성 시료에서 수행하였다. 플라즈마 처리는 표면 거칠기를 적당히 증가시키고 극성 작용기를 생성하였으며, AFM과 XPS 데이터로 입증되었다. 주목할 점은 플라즈마 노출 후 접촉각이 약간 상승(79.5°에서 ~95°로)했으나 금 코팅 후 크게 감소하여 친수성이 향상됨을 나타냈다.
중량 분석 결과 플라즈마 노출을 60초에서 240초로 연장하면 PEEK 아블레이션이 2배 증가하여 더 높은 에너지 입력을 반영하였다. 반면 150초와 300초 금 스퍼터링은 금의 폴리머 부착을 개선하는 연속 층을 형성하였다.
XPS 분석은 명확한 추세를 보였다: 플라즈마 처리는 표면 탄소 함량을 감소시키고 산소를 증가시켜 극성 기 도입을 확인하였다. 이후 금 증착은 산소 신호를 감소시키고 금 신호를 높였으며, 300초 스퍼터링 시료에서 가장 강한 금 신호를 보였다.
AFM 이미지는 더 긴 플라즈마 노출이 더 거친 표면을 생성하며, 이는 스퍼터링 시 더 크고 균일한 금 클러스터 형성을 촉진함을 보여주었다. 30초 금 층은 불연속적인 섬을 형성한 반면, 150초와 300초 코팅은 거칠기가 증가한 연속 막을 형성하였다.
제타 전위 측정에서 플라즈마 활성화는 KCl과 PBS 모두에서 표면 전하를 더 음성으로 높였으며, 금 코팅은 전위를 덜 음성 또는 약간 양성으로 이동시켰다. 이 효과는 더 높은 이온 강도인 PBS에서 더 두드러졌으며, 설계된 표면 화학이 생리적 조건에 반응함을 나타낸다.
ICP-MS 데이터는 얇은 금 층(30초)이 불연속적 특성으로 인해 PBS로 더 높은 금 농도를 방출함을 보여주었다. 반면 연속적인 300초 코팅은 무시할 만한 금 방출로 잠재적 세포독성을 감소시켰다.
세포 분석은 플라즈마 처리 및 금 코팅 PEEK의 우수한 성능을 확인하였다. 6시간에 순수 PEEK의 세포 부착은 조직 배양 플라스틱과 비슷했으나 플라즈마 처리 표면에서 증가하였다. 72시간 후 최상의 결과는 60초 플라즈마 + 300초 금과 240초 플라즈마 + 300초 금에서 관찰되었으며, 연속 금 막이 섬유아세포 증식에 유리한 기질을 제공하였다. 얇은 금 층(30초)은 가장 낮은 세포 수를 보였으며, 더 높은 금 용출과 상관관계가 있었다.
SEM 이미지는 이러한 결과를 뒷받침하며, 최적화 표면에서 잘 펴진 길쭉한 섬유아세포를 보여주는 반면 얇은 금 층에서는 둥근 형태의 세포가 나타나 부착 불량을 시사하였다.
결론
아르곤 플라즈마 활성화 후 금 스퍼터 코팅은 PEEK 표면을 생물의료용으로 효과적으로 개질한다. 240초 플라즈마 노출은 표면 아블레이션을 2배 증가시키고 극성 기를 도입하며, 150~300초 금 층은 연속 나노구조 막을 증착하여 습윤성, 표면 전하, 섬유아세포 부착을 크게 개선한다. 얇은 금 층은 더 높은 금속 방출과 감소된 세포 증식으로 부적합하다. 전반적으로 결합된 플라즈마-금 접근법은 향상된 세포적합성을 가진 PEEK 재료를 제공하며, 정형외과 및 척추 임플란트 응용에 적합하다.
약어
- AFM:
- 원자력 현미경
- CO2:
- 이산화탄소
- DAPI:
- 4′,6-디아미디노-2-페닐인돌 이염산염
- DMEM:
- Dulbecco 변형 Eagle 배지
- FBS:
- 태아 소 혈청
- ICP-MS:
- 유도 결합 플라즈마 질량 분석법
- KCl:
- 염화칼륨
- L929:
- 마우스 배아 섬유아세포
- PBS:
- 인산염 완충 식염수
- PEEK:
- 폴리에테르에테르케톤
- PGA:
- 폴리글리콜라이드
- PHB:
- 폴리하이드록시부티레이트
- PLA:
- 폴리(L-락타이드)
- PMMA:
- 폴리메틸메타크릴레이트
- PTFE:
- 폴리테트라플루오르에틸렌
- SEM:
- 주사 전자 현미경
- TCPS:
- 조직 배양 폴리스티렌
- UHMWPE:
- 초고분자량 폴리에틸렌
- WCA:
- 물 접촉각
- XPS:
- X-선 광전자 분광법