단백질 친화성 분리를 위한 기능성 나노 흡착제

초록

티올 작용성 실리카 나노스피어(SiO₂ -SH NSs) 평균 직경이 460nm인 열수 경로를 통해 합성되었습니다. 이어서, 준비된 SiO₂ -SH NS는 SnO₂에 의해 수정되었습니다. SnO₂를 제공하는 양자점 /SiO₂ 표적 단백질을 추적하는 데 사용할 수 있는 명백한 형광을 갖는 복합 NS. SnO₂ /SiO₂ NS는 SnO₂를 얻기 위해 환원 글루타티온(GSH)에 의해 추가로 수정되었습니다. /SiO₂ -글루타티온 S를 특이적으로 분리할 수 있는 GSH NS -트랜스퍼라제 태그(GST 태그) 단백질. 또한 SnO₂에서 분리된 glutathione peroxidase 3(GPX3)의 peroxidase 활성 /SiO₂ - 시험관내 GSH NS를 평가하였다. 결과는 준비된 SnO₂ /SiO₂ -GSH NS는 무시할 수 있는 비특이적 흡착, 높은 농도의 단백질 결합(7.4mg/g) 및 우수한 재사용 특성을 나타냅니다. 한편, 이러한 NS에 의해 분리된 GST 태그가 붙은 GPX3은 산화 환원 상태와 퍼옥시다제 활성을 유지할 수 있습니다. 따라서 준비된 SnO₂ /SiO₂ -GSH NS는 GST 태그 단백질의 신속한 분리 및 정제에 유망한 응용 분야를 찾을 수 있습니다.

<섹션 데이터-제목="배경">

배경

단백질의 용이한 분리 및 정제는 생체 내 생체 변형, 약물 대사, 프로스타글란딘 및 스테로이드 호르몬의 생합성 및 방향족 아미노산의 분해에서 매우 중요하다[1,2,3,4,5,6]. 분리된 단백질은 항원 및 백신 생산, 분자 면역학 및 구조, 생화학 및 세포 생물학 연구에 사용할 수 있습니다. 글루타치온 S -트랜스퍼라제(GST)는 GST 유전자 융합 시스템 및 의약 효과 표적화 분야 또는 종양 표지자로 사용될 수 있는 해독 동위효소의 주요 그룹을 나타냅니다[7, 8]. 현재 다양한 단백질을 정제하기 위해 침전, 크로마토그래피, 한외여과, 투석과 같은 다양한 방법이 이용 가능하며, 특히 생물학적 거대분자와 상보적인 리간드 사이의 자연적인 생물학적 친화력에 기초한 친화성 분리는 매우 중요하다[9,10,11,12 ,13,14]. 그러나 전장, 가용성, 천연 융합 단백질의 성공적인 생산 및 정제는 세포 파편 및 콜로이드 오염 물질을 제거하기 위한 전처리의 필요성, 비교적 긴 작업 시간 및 단백질 용해도와 같은 다양한 장애물로 인해 여전히 지연되고 있습니다. 다행스럽게도 이러한 단점은 나노 물질을 적용하여 표적 단백질의 분리 및 정제를 지원함으로써 극복할 수 있었습니다[15,16,17,18,19]. 예를 들어, 자기 SiO₂ -NiO 나노복합체는 His-tagged 단백질을 분리할 수 있다[20]. 그럼에도 불구하고 나노물질은 생물학 전쟁에 대처하기 위한 민감한 생체 분자 및 의학적 진단 도구로 사용할 수 있는 시각화 및 형광 기술에 종종 비활성이기 때문에 다양한 단백질 분리에서 여전히 짧은 다리를 가지고 있습니다[21,22,23]. 이러한 의미에서 GPX3(glutathione peroxidase 3)와 같은 재조합 단백질의 분리 및 정제에 응용을 촉진하기 위해서는 형광 반응을 갖는 나노 물질을 찾는 것이 필수적입니다.

우리는 특히 나노스케일 SnO₂에 주목합니다. 양자점(QD), 화학적 안정성 및 생체 적합성이 우수한 n형 와이드 밴드갭(3.6eV) 반도체로서 SnO₂ 가시 스펙트럼 영역에서 흡광도를 나타냅니다. 여기서 우리는 형광 SnO₂를 도입하기 위한 스마트한 경로를 설정합니다. 원하는 SnO₂를 개발하기를 희망하는 실리카 나노구(NS) 표면의 양자점 /SiO₂ GST 태그가 붙은 단백질의 분리 및 정제에 잠재적으로 응용할 수 있는 나노구조. 첫째, 티올 작용성 실리카 나노구(SiO₂ -SH NSs)는 열수 경로를 통해 준비되었습니다. 생성된 SiO₂ -SH NS는 SnO₂와 혼합되었습니다. SiO₂를 제공하는 양자점 /SnO₂ 명백한 형광 흡수를 갖는 합성 NS. SiO₂ /SnO₂ NS는 SiO₂를 얻기 위해 환원 글루타티온(GSH)에 의해 추가로 수정되었습니다. /SnO₂ - GST 태그 단백질의 친화성 분리 가능성이 있는 GSH NS. 제조된 SnO₂의 능력 및 퍼옥시다제 활성 /SiO₂ -GST 태그가 붙은 단백질을 분리하는 GSH NS는 SDS-PAGE 분석으로 평가되었습니다.

실험

재료 및 방법

헥사데실트리메틸 암모늄 브로마이드(CTAB), 주석(IV) 염화물(SnCl₄ ), 트리에틸아민(TEA) 및 이소프로판올은 Tianjin Kermel Chemicals Reagent Company(Tianjin, China)에서 제공했습니다. AgNO₃ Tianjin Fuchen Technology Development Co., Ltd.(Tianjin, China)에서 구입했습니다. 3-메르캅토프로필-트리메톡시실란(MPS)은 Alfa-Aesar(중국 상하이)에서 제공했습니다. Tetraethyl orthosilicate (TEOS)는 Tianjin Fuchen Chemicals (Tianjin, China)에서 공급했습니다. 디히드로니코틴아미드 아데닌 디뉴클레타이드 포스페이트(NADPH), 티오레독신 및 티오레독신 환원효소는 Sigma(Beijing, China)에서 입수했습니다. Glutathione Sepharose 4B(미국 스톡홀름)는 GE Healthcare의 제품입니다. 디티오트레이톨(DTT)은 Aladdin Industrial Corporation(Inalco SPA, Italy)에서 입수할 수 있었다. 모든 화학 시약은 분석 시약으로 추가 정제 없이 사용되었습니다.

SnO의 준비₂ 양자점

일반적인 합성에서 [24], 3.5g SnCl₄ ·5H₂ O를 50mL H₂에 첨가했습니다. O, 그런 다음 5mL 암모니아를 교반하면서 용액에 첨가했습니다. 이후 원심분리하여 얻은 침전물을 탈이온수로 여러 번 세척하여 과잉의 Cl^- 을 제거하였다. 이온. 얻어진 침전물에 탈이온수 30ml를 가한 후, 2mol/L 암모니아로 용액의 pH를 12로 조절하였다. 혼합 용액을 테플론 라이닝 스테인리스강 오토클레이브에 옮기고 밀봉하고 150°C에서 24시간 동안 가열했습니다. 가열이 완료되면 혼합 용액을 냉각하고 원심분리한 후 에탄올-이소프로판올(부피비 1:1)로 충분히 세척하여 SnO2를 얻었다. QD.

SnO의 준비₂ /SiO₂ -SH NS

일반적인 합성에서 0.2g SnO₂ QD 및 0.09g CTAB를 H₂의 혼합 용매에 용해했습니다. 자기 교반(200G, r) 하에 O(42.5mL) 및 절대 알코올(7mL) =180mm). 생성된 용액에 추가로 20분 동안 교반하면서 2.7mL TEA를 첨가했습니다. 혼합용액을 60°C에서 5시간 가열하면서 TEOS 3.5mL와 MPS 0.35mL를 천천히 적하한 후 원심분리(12,800G, r =180mm) 및 HCl-에탄올(30mL) 및 물(30mL)로 완전히 세척하여 SnO₂를 얻습니다. /SiO₂ -SH NS를 3회 동안 물에 분산시켰습니다(0.12g/mL).

SnO의 표면 수정₂ /SiO₂ -SH NS

4밀리리터의 0.12g/mL SnO₂ /SiO₂ -SH NS를 PBS(0.01mol/L, pH =7.4)로 3회 세척했습니다. 이 SnO₂ /SiO₂ -SH NS를 30mL 16.7mg/mL GSH 용액에 추가하고 항온 발진기로 37°C에서 24시간(120회전/분) 동안 진동했습니다. 진동이 끝나면 혼합 용액을 원심분리하여 SnO₂ /SiO₂ -GSH NS; 그런 다음 침전물을 30mL PBS(0.01mol/L, pH =7.4)로 3회 완전히 세척하여 물리적 흡착을 통해 과도한 GSH를 제거하여 원하는 SnO2를 얻었다. /SiO₂ -GSH NS. 결과 SnO₂ /SiO₂ -GSH NS는 알코올에 첨가되었습니다(25%, v /v ) 4°C에서 보관합니다.

GST 태그가 붙은 단백질의 분리

Escherichia coli의 세포 용해물에서 혼합 단백질을 수집했습니다. , 이는 물 용해에 의한 것입니다(농도 0.01mol/L, pH 7.4). 시험관 내 단백질 발현의 경우 Arabidopsis thaliana 플라스미드 pGEX-6p1(GPX3을 대조군으로 사용)에 복제하고 프레임에 삽입했습니다. pGEX-GPX3, pGEX-OST1 및 pGEX-ABI2 구조가 E에 도입되었습니다. 대장균 BL21(DE3) 세포. 재조합 GST 태그가 붙은 단백질은 글루타티온 세파로스 4B 및 SnO₂를 사용하여 정제되었습니다. /SiO₂ -GSH NS. 유전자 클로닝에 사용된 프라이머는 다음과 같습니다:GPX3의 경우 정방향 프라이머, 5'-GATTGATCCTCGCCATCGACGGTGGAACAA-3'; 역방향 프라이머, 5'-CACCTCGAGTCAAGCAGATGCCAATAGCTT-3'; OST1의 경우 정방향 프라이머, 5'-GCCGAATTCATGGATCGACCAGCAGTGA-3'; 역방향 프라이머, 5'-CCCGTCGACTCACATTGCGTACACAATC-3'; ABI2의 경우 정방향 프라이머, 5'- GCGGAATTCGAGAGTAGAAGTCTGTTTG-3'; 역방향 프라이머, 5'- GCGCTCGAGTCAATTCAAGGATTTGCTC-3'.

PBS 용액(0.01mol/L, pH =7.4)으로 세척한 후, 제조된 SnO₂ /SiO₂ -GSH NS는 1000μL E에 직접 도입되었습니다. 대장균 SnO₂를 허용하기 위해 용해물을 4°C에서 2시간 동안 흔들어(회전 속도:90 rev/min) /SiO₂ -GST 태그가 붙은 단백질을 포획하기 위한 GSH NS. 진탕이 완료되면, 이들 NS를 원심분리에 의해 용액으로부터 분리하고 PBS 용액으로 완전히 세척하여 잔류 미포획 단백질을 제거하였다. GST 태그 단백질 결합 SnO₂ /SiO₂ -GSH NS를 300μL 및 0.5mol/L GSH 용액으로 3회 세척하여 표면에서 GST 태그 단백질을 분리했습니다. 별도로 수집된 단백질 용액은 나트륨 도데실설페이트 폴리아크릴아미드 겔 전기영동(SDS-PAGE)으로 검출하였다. 분리된 단백질의 농도는 BCA protein Assay Kit로 측정하였다. SnO₂ /SiO₂ -GSH NS는 동일한 방법으로 여러 번 표적 단백질을 분리하기 위해 재사용될 수 있습니다.

글루타티온 과산화효소 활성 측정

분리된 GPX3 활성은 Delaunay et al. [25]. GST 태그가 붙은 GPX3의 PreScission protease에 의해 GST tag를 잘라낸 후, GPX3를 활성 분석에 사용하였다. 먼저, 98μL 반응 완충액(E. coli의 100mmol/L Tris-Cl, 0.3mmol/L NADPH, 1.34μmol/L 티오레독신 및 0.18μmol/L 티오레독신 환원효소 포함) 용해물)을 튜브에 첨가하고; 완전히 혼합한 후, 1.35μmol 정제된 GPX3을 생성된 반응 완충액에 첨가하였다. 그런 다음, 혼합 용액을 2μL H₂에 첨가했습니다. O₂ (5mmol/L) 반응을 시작하고 340nm에서 NADPH 소비를 분광 측정으로 수집했습니다.

정제 GPX3의 산화환원 상태 분석

GST 태그는 PreScission 프로테아제에 의해 GST 태그가 지정된 GPX3에서 잘렸습니다. 분리된 GPX3은 5mmol/L H₂로 처리되었습니다. O₂ 및 1mmol/L DTT를 10분 동안 사용하여 정제된 GPX3의 산화환원 상태를 변경합니다. 생성된 GPX3은 산화환원 상태의 시험관내 분석에 사용되었습니다. 추출물은 비환원 15% SDS-PAGE 젤로 평가했습니다.

특성화

제조된 SnO₂의 형태 및 조성 /SiO₂ -GSH NS는 투과전자현미경(TEM, JEM-2010, Japan), 주사전자현미경(SEM, JSM 5600LV, Japan), X선 회절(XRD, X' Pert Philips, Holland) 및 형광 분광기( FL, FluoroSENS, Britain, 여기 파장 260nm). 분리된 GST 태그 단백질은 70V의 사전 농축 전압과 120V의 분리 전압으로 소듐 도데실설페이트 폴리아크릴아미드 겔 전기영동(SDS-PAGE, Power PAC 300, China)으로 검출되었습니다. 항온 발진기는 Shanghai ChemStar Instruments에서 구입했습니다. , Co., Ltd. (ATS-03M2R, 중국). 분리된 단백질의 농도는 BCA protein Assay Kit(Beijing CoWin Biotech, China)로 측정하였다.

결과 및 토론

SnO의 TEM, SEM, XRD 및 형광 분석₂ QD 및 SnO₂ /SiO₂ -GSH NS

그림 1은 합성된 SnO₂의 고해상도 TEM(HRTEM) 이미지와 XRD 패턴을 보여줍니다. 양자점. 합성된 SnO₂ QD는 구형이고 평균 직경이 5nm로 좁은 입자 크기 분포를 나타내며(그림 1a), (110) 평면의 격자 간격은 0.29nm입니다(그림 1b). 잘 분해된 격자 이미지는 준비된 SnO₂ QD는 고도로 정렬된 결정 구조를 가지고 있습니다. SnO₂의 해당 선택 영역 전자 회절 패턴 QD(그림 1c)는 관련 XRD 패턴(그림 1d)과 일치하는 단일 Cassiterite 단계로 인덱싱될 수 있습니다. 즉, 2theta =26.6°(110), 33.9°(101), 38.0°(200), 51.8°(211), 65.9°(301), 78.7°(321)의 특성 피크가 표준과 일치합니다. Cassiterite SnO₂의 XRD 데이터 (JCPDS 카드 번호 41-1445). 게다가, 강렬한 XRD 피크는 준비된 SnO₂ QD는 잘 결정화되어 있으며 다른 특징적인 피크가 없다는 것은 적철광 또는 수산화물 불순물이 포함되어 있지 않음을 시사합니다.

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TEM(a ), HRTEM(b ) 이미지, 선택된 영역 전자 회절 패턴(c ) 및 XRD 패턴(d ) 준비된 SnO₂ 양자점

그림 2는 SnO₂의 SEM 및 TEM 이미지를 제공합니다. /SiO₂ -GSH NS. 준비된 SnO₂ /SiO₂ -GSH NS는 구형이고 평균직경이 약 430nm이며 표면이 다소 거칠어 보인다(Fig. 2a, b). 그 동안 SnO₂ QD(약 5~15nm)는 SiO₂ 표면에서 수정됩니다. 미소구체(그림 2c, d)는 해당 SEM 이미지와 일치합니다. SnO₂ 및 실리카 NS가 집계되었습니다.

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검색엔진 마케팅(a , b ) 및 TEM(c , d ) 준비된 SnO₂의 이미지 /SiO₂ -GSH NS

그림 3a는 합성된 SnO₂의 XRD 패턴을 보여줍니다. /SiO₂ -GSH NS. 2ta =110°, 101°, 200°, 211°, 301° 및 321°의 주요 피크는 SnO₂의 피크와 일치합니다. (그림 1d). 게다가 SnO₂ /SiO₂ -GSH NSs는 약 23°(JCPDS 카드 번호 76-0933)에서 비정질 실리카의 강한 특성 피크를 보여 SnO₂ 가시광 응답을 갖는 SiO₂ 표면에 성공적으로 도입되었습니다. NS. 그림 3b는 SnO₂의 형광 스펙트럼을 보여줍니다. /SiO₂ - 368nm에서 GSH NS. SnO₂ /SiO₂ -GSH는 SnO₂의 산소 결손에 기인하는 강렬한 형광 방출을 나타냅니다. . 그림 3c는 SnO₂의 형광 이미징을 제공합니다. /SiO₂ -GSH NS가 E에서 GST 태그가 지정된 GPX3을 분리하는 데 사용되는 경우. 코일 용해물. 준비된 SnO₂ 부분에 녹색 형광이 분명히 있음을 알 수 있습니다. /SiO₂ -GSH NS가 사용됩니다. SnO₂ SiO₂의 표면에서 수정되었습니다. 및 SnO₂ /SiO₂ -GSH NS는 우수한 형광 특성을 가지고 있습니다.

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XRD 패턴(a ), 형광 스펙트럼 (b ) 및 형광 이미징(c ) 준비된 SnO₂ /SiO₂ -GSH NS

SDS-PAGE 분석

준비된 SnO₂의 능력을 추정하려면 /SiO₂ -GST 태그가 붙은 단백질을 분리하는 GSH NS에 대해 SDS-PAGE 분석을 수행했습니다. 그림 4는 SnO₂로 분리된 GST 태그 GPX3의 SDS-PAGE 분석 결과를 보여줍니다. /SiO₂ -GSH NS. SnO₂ /SiO₂ -GSH NS는 E에서 표적 단백질을 효율적으로 풍부하게 할 수 있습니다. 대장균 lysate, 특히 해리된 단백질의 양은 10-100mmol/L 범위의 GSH 농도가 증가함에 따라 증가하는 경향이 있습니다(그림 4a의 레인 3-6). 준비된 SnO₂에 의해 표적 단백질이 특이적으로 분리될 수 있음이 분명합니다. /SiO₂ - E의 GSH NS 대장균 lysate와 비특이적이 거의 없었다.

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SnO₂로 분리된 정제된 GST 태그 단백질의 SDS-PAGE 분석 /SiO₂ -GSH NS. 아 레인 1, 마커; 레인 2, E. 대장균 용해물; 레인 3-6은 SnO₂에서 씻어낸 분획을 나타냅니다. /SiO₂ - GSH 용액의 농도가 다른 GSH NS(레인 1, 10mmol/L, 레인 2, 20mmol/L, 레인 3, 50mmol/L, 레인 4, 100mmol/L). ㄴ 레인 1, 마커; 레인 2, E. 대장균 용해물; 레인 3, 1차 분리; 차선 4, 2차 분리; 레인 5, 세 번째 분리; 및 레인 6, 글루타티온 세파로스 4B에서 세척된 분획

준비된 SnO₂의 재사용 특성을 조사하기 위해 /SiO₂ -GSH NS, GST 태그가 지정된 GPX3을 분리하는 데 반복적으로 사용했습니다. 그림 4b와 같이(레인 1은 마커, 레인 2는 GST-GPX3 함유 E. coli 용해물, 레인 3은 1차 분리, 레인 4는 2차 분리, 레인 5는 3차 분리, 레인 6은 글루타티온 세파로스 4B), 합성된 SnO₂에서 씻어낸 분획을 나타냅니다. /SiO₂ -GSH NS는 E에서 추출한 GST 태그 GPX3에 대해 특별한 선택성을 나타냅니다. 대장균 lysate, 그리고 그들의 특이성과 친화력은 3주기의 반복 분리 후에도 영향을 받지 않습니다.

합성된 SnO₂의 보편성을 테스트하기 위해 /SiO₂ -GST-tagged protein을 정제하기 위한 GSH NSs의 경우, GST-tagged protein 3종(GST-tagged GPX3, GST-tagged OST1, GST-tagged ABI2)을 선택하여 실험을 진행하였습니다. 그림 5와 같이 GST 태그가 붙은 GPX3, OST1 및 ABI2 단백질은 SnO₂에 의해 특이적으로 분리될 수 있습니다. /SiO₂ - E의 GSH NS 대장균 용해물(레인 3, 6, 9); 그러면 GPX3을 모두 얻을 수 있습니다(SnO₂에서 GST 태그를 잘라냅니다). /SiO₂ -GST 태그가 붙은 GPX3) 및 SnO₂에서 용출되는 GST 태그를 결합하는 GSH NSs /SiO₂ -GSH NS(레인 13, GPX3, 레인 14, GST 태그), 글루타티온 세파로스 4B(레인 2, 5, 8, 11, 12)와 유사한 효과가 있습니다. SnO₂에 의한 정제된 단백질의 농도 /SiO₂ -GSH NS는 7.4mg/g(GST 태그 GPX3), 7.1mg/g(GST 태그 OST1), 6.8mg/g(GST 태그 ABI2)으로 SnO₂ /SiO₂ -GSH NS는 E에서 GST 태그가 지정된 단백질을 정제하는 데 좋습니다. 대장균 용해물. 준비된 SnO₂ 간의 결합력을 비교하기 위해 /SiO₂ -GSH NSs와 다른 물질인 Glutathione Sepharose 4B(미국 스톡홀름에서 구매)를 비교 실험 물질로 사용하였다. 글루타티온 세파로스 4B로 정제한 총 단백질은 각각 7.1mg/mL(GST 태그 GPX3), 6.9mg/mL(GST 태그 OST1) 및 5.6mg/mL(GST 태그 ABI2)였습니다. 준비된 SnO₂의 결합력이 /SiO₂ -GSH NS는 상품 4B의 NS보다 높습니다.

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정제된 재조합 GPX3, OST1 및 ABI2 단백질의 SDS-PAGE 분석. 레인 1, 4, 7, E. 대장균 용해물; 레인 2, 5 및 8, 상업용 글루타티온 세파로스 4B(GE Healthcare, USA)에서 용출된 단백질; 레인 3, 6, 9, SnO₂에서 용출된 단백질 /SiO₂ -GSH NS; 레인 10, 마커; 레인 11 및 13, 글루타티온 세파로스 4B 결합 GST-GPX3 및 SnO₂에서 GST 태그가 잘린 후 얻은 GPX3 /SiO₂ -GSH NS는 GST 태그가 지정된 GPX3에 바인딩됩니다. 레인 12 및 14, 글루타티온 세파로스 4B 및 SnO₂에서 용리된 GST 태그 /SiO₂ -GSH NS

GST 태그 GPX3의 산화환원 상태 및 과산화효소 활성 분석

준비된 SnO₂에 의해 분리된 GST-tagged GPX3의 산화환원 상태 및 활성을 분석하기 위해 /SiO₂ -GSH NS, 우리는 분리된 GPX3를 얻기 위해 GST 태그를 잘라냅니다. 그림 6a는 GPX3 산화환원 상태의 시험관 내 분석을 보여줍니다(3개의 독립적인 실험의 대표적인 겔에 해당). 레인 1 및 2는 글루타티온 세파로스 4B 결합 GST 태그 GPX3에서 GST 태그가 절단된 후 얻은 GPX3을 나타냅니다(레인 1은 산화된 GPX3이고 레인 2는 환원된 GPX3임). 레인 3과 4는 GST 태그가 SnO₂에서 잘린 후 얻은 GPX3을 나타냅니다. /SiO₂ -GSH 결합 GST 태그 GPX3(레인 3은 산화된 GPX3이고 레인 4는 환원된 GPX3임); 레인 5는 마커를 나타냅니다. 도 6a에서 보는 바와 같이 Glutathione Sepharose 4B(레인 1 및 2) 및 SnO₂에서 분리된 정제된 GPX3 /SiO₂ -GSH NS(레인 3 및 4)는 산화 및 환원된 상태를 가지며 환원된 GPX3는 산화된 대응물보다 더 느리게 이동합니다. 이는 GPX3이 시험관 내에서 산화 및 환원 상태로 존재하고 환원된 Cys 잔기의 변형 결과로 환원 및 산화 형태가 분리될 수 있다는 우리의 이전 발견과 잘 일치합니다[26,27,28].

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아 GPX3 산화환원 상태의 시험관 내 분석:레인 1 및 3(산화된 GPX3) 및 2 및 4(환원된 GPX3)는 GST 태그가 글루타티온 세파로스 4B 및 SnO_{2 /SiO₂ -GSH 바운드 GST 태그 GPX3, 각각; 레인 5, 마커. ㄴ GPX3의 과산화효소 활성 분석}

그림 6b는 GPX3의 퍼옥시다제 활성 분석을 보여줍니다:라인 GPX3*, 글루타티온 세파로스 4B, 티오레독신, 티오레독신 환원효소, NADPH 및 H_{2의 존재하에서 정제된 GPX3의 완전한 분석 O₂; 라인 GPX3, SnO₂ 사이의 완전한 반응 /SiO₂ -GSH NS는 GPX3, 티오레독신, 티오레독신 환원효소, NADPH 및 H₂를 분리했습니다. O₂; 라인 GPX3 없음, GPX3 부재 시 완전한 반응; 및 라인 No Trx, 티오레독신 부재 하에 완전한 반응. 그림 6b는 Glutathione Sepharose 4B와 SnO₂에서 분리된 정제된 GPX3의 글루타티온 퍼옥시다제 활성을 보여줍니다. /SiO₂ - 시험관내 GSH NS. 티오레독신을 기질로 하여 정제된 GPX3가 상당한 퍼옥시다제 활성을 나타내는 것을 볼 수 있으며, 이는 GPX3이 SnO₂에서 분리되었음을 나타냅니다. /SiO₂ -GSH NS는 자연 상태에서 존재합니다.}

결론

실리카로 보호된 SnO₂를 제조하기 위한 손쉬운 방법이 확립되었습니다. QD 나노스피어(SnO₂ /SiO₂ NS). SnO₂ /SiO₂ NS는 SnO₂를 제공하기 위해 글루타티온에 의해 추가로 수정됩니다. /SiO₂ -글루타티온 S의 친화성 분리를 위한 GSH NS -트랜스퍼라제 태그(GST 태그) 재조합 단백질. GST-tagged GPX3, GST-tagged LOV 및 GST-tagged ABI2를 분리하는 능력의 관점에서, 연구 결과에 따르면 준비된 SiO₂ /SiO₂ -GSH NS는 특이적인 분리, 고농도의 단백질 결합 및 우수한 재사용 특성을 나타냅니다. 또한 GST 태그가 지정된 GPX3에서 분리된 GPX3은 시험관 내 산화 환원 상태와 GPX 활성도 유지하므로 준비된 SnO₂ /SiO₂ -GSH NS는 GST 태그 단백질의 신속한 분리 및 정제에 대한 유망한 잠재력을 가질 수 있습니다.