마이크로RNA-342-5p(miR-342-5p)는 죽상경화증(AS)에 관여하나 기전적 역할은 불분명합니다. 본 연구는 miR-342-5p가 Wnt3a 신호경로를 어떻게 조절하고 ApoE⁻/⁻ 마우스 모델에서 반점 취약성과 신생혈관화에 영향을 미치는지 조사했습니다. 24주령 수컷 ApoE⁻/⁻ 마우스에 16주간 고지방 사료 급여로 취약 반점 유도. miR-342-5p와 Wnt3a 발현을 RT-qPCR과 웨스턴 블롯으로 정량. miR-342-5p 억제(안타고미르)와 Wnt3a 과발현(oe-Wnt3a 벡터)이 혈청 지질, 염증 및 산화스트레스 사이토카인, 반점 형태, 미세혈관 밀도(MVD)에 미치는 기능적 효과 평가. 결과: AS 대동맥에서 miR-342-5p 상향조절, Wnt3a와 β-카테닌 하향조절; miR-342-5p가 Wnt3a 3'-UTR 직접 표적화. miR-342-5p 길항 또는 Wnt3a 과발현 시 총콜레스테롤, 중성지방, LDL-C, 염증성 사이토카인(IL-5, IL-12p70, IFN-γ, TNF-α) 감소, HDL-C와 SOD 활성 증가, 지질 핵 면적 감소, 콜라겐 함량 증가, 대식세포 침윤 감소, MVD 감소. 반면 miR-342-5p 과발현은 모든 매개변수 악화. 따라서 miR-342-5p는 Wnt3a 억제로 반점 불안정성과 혈관신생 촉진; Wnt3a 복원으로 이러한 효과 완화, AS 치료 표적 제안.
죽상경화증(AS)은 전 세계 심혈관 이환율과 사망률의 주원인입니다. 지질 풍부 괴사핵, 얇은 섬유성 캡, 대식세포 침윤, 콜라겐 감소로 특징되는 반점 불안정화는 파열과 급성 사건으로 이어집니다. 지질저하 요법이 예후를 개선했으나 많은 환자가 여전히 심혈관 사건을 경험하며, 새로운 분자 중재 필요성을 강조합니다.
마이크로RNA(miRNA)는 표적 유전자를 전사 후 조절하는 짧은 비암호화 RNA입니다. 14q32 miRNA 클러스터 내 위치한 miR-342-5p는 TGF-β와 VEGF 경로를 통한 혈관신생 영향과 혈관 질환에서 염증 반응 조절이 보고되었습니다. 그러나 AS에서의 구체적 역할과 주요 신호 캐스케이드와의 상호작용은 불완전하게 정의되어 있습니다.
Wnt/β-카테닌 경로는 혈관 세포 항상성에 필수적이며, 평활근 세포 증식, 내피 무결성, 반점 조성에 영향을 미칩니다. 선행 연구에서 miR-342-5p가 다른 질환 맥락에서 Wnt3a를 음성 조절함이 나타나 AS에서의 잠재적 조절 축을 시사했습니다.
여기서 miR-342-5p/Wnt3a 상호작용을 AS에서 규명하고 ApoE⁻/⁻ 마우스에서 반점 안정성과 혈관신생에 미치는 영향을 평가합니다.
수컷 ApoE⁻/⁻ 및 C57BL/6J 마우스(8주령)를 12시간 명/암 주기, 표준 사료 또는 고지방 사료(20% 지방, 0.25% 콜레스테롤) 16주 급여. 모든 절차 NIH 지침 준수, 청해성 인민병원 기관 동물 관리 및 사용 위원회 승인(윤리 번호 201870726).
ApoE⁻/⁻ 마우스를 6군(n=12씩) 무작위 배정: AS, NC(생리식염수), miR-342-5p 아고미르, miR-342-5p 안타고미르, oe-Wnt3a, miR-342-5p 아고미르+oe-Wnt3a. 처리(40 mg/kg, 꼬리정맥) 8주간 격주 투여. C57BL/6J 마우스는 정상 대조군.
혈청 총콜레스테롤(TC), 중성지방(TG), LDL-C, HDL-C, 말론디알데히드(MDA), 초산화물 디스뮤타제(SOD) 상용 키트(난징 건성 생물공학)로 측정. 사이토카인(IL-5, IL-12p70, IFN-γ, TNF-α) ELISA(MultiSciences)로 정량.
12시간 금식 후 마우스 안락사; 대동맥 수확, RNA-free PBS 세척, 조직학(HE, Oil Red O, Sirius Red) 또는 분자 분석(RT-qPCR, 웨스턴 블롯)용 분할. 조직학용 시료 파라핀 포매, 4 µm 절편, 표준 프로토콜 염색.
RT-qPCR로 miR-342-5p, Wnt3a, β-카테닌, 참조 유전자(U6, β-actin) 정량, 2⁻ΔΔCt 법 사용. 웨스턴 블롯으로 Wnt3a, β-카테닌, CD34, α-SMA, β-actin 평가, ImageJ 농도 측정.
절편을 MOMA-2(대식세포), α-SMA(평활근 세포), CD34(내피 세포) 면역염색. 염색 강도 Image Pro Plus 6.0 정량, 반점 취약성 지수=(대식세포+지질%)/(평활근세포+콜라겐%) 계산. MVD는 CD34⁺ 미세혈관/mm² 계수로 결정.
Wnt3a 3'-UTR(야생형, 돌연변이) GP-miRGLO에 클로닝. 마우스 대동맥 내피 세포에 리포터와 다양한 농도 miR-342-5p 아고미르 공동 형질전환, 48시간 후 루시페라제 활성 측정.
데이터 평균±SD 제시. 두 군 비교 비대응 t-검정; 다군 비교 일원분산분석+Tukey 사후 검정. 유의수준 p<0.05.
RT-qPCR로 정상 대비 AS 마우스에서 miR-342-5p 유의 증가(≈3.5배, p<0.01), Wnt3a 동시 감소(≈0.4배, p<0.01). 웨스턴 블롯으로 Wnt3a, β-카테닌 단백질 감소 확인. 루시페라제 분석에서 miR-342-5p가 Wnt3a 3'-UTR 직접 결합, 100 pM에서 리포터 활성 최대 64% 감소, 결합 부위 돌연변이로 효과 소멸.
miR-342-5p 안타고미르와 oe-Wnt3a가 TC, TG, LDL-C 현저 감소(≈30-40%, p<0.01), HDL-C 증가(≈20%, p<0.05) 유도. miR-342-5p 아고미르는 이상지질혈증 악화. Wnt3a 과발현이 miR-342-5p 과발현 부작용 구제.
AS 마우스에서 혈청 IL-5, IL-12p70, IFN-γ, TNF-α, MDA 상승(p<0.01). miR-342-5p 안타고미르 또는 oe-Wnt3a로 이 사이토카인과 MDA ~40% 감소, SOD 활성 ~35% 증가(p<0.01). miR-342-5p 아고미르는 염증 및 산화 마커 추가 악화.
HE 염색에서 miR-342-5p 안타고미르와 oe-Wnt3a군 반점 면적 감소, 섬유성 캡 비후, 지질 핵 감소, 콜라겐 함량 증가(Sirius Red) 관찰(p<0.01). Oil Red O 정량으로 처리군 지질 함량 ~30% 감소 확인. 반점 취약성 지수 안타고미르/oe-Wnt3a군 45% 감소, miR-342-5p 아고미르군 60% 증가(p<0.01).
면역조직화학에서 miR-342-5p 안타고미르와 oe-Wnt3a가 MOMA-2⁺ 대식세포 비율 ~50% 감소, α-SMA⁺ 평활근 세포 ~30% 증가 유도(p<0.01). 병합 치료(miR-342-5p 아고미르+oe-Wnt3a)는 대식세포/평활근 세포 수준을 기준선 방향 회복.
CD34 면역염색과 웨스턴 블롯으로 miR-342-5p 안타고미르와 oe-Wnt3a가 AS 마우스 대비 MVD ~55% 감소(p<0.01). miR-342-5p 아고미르 MVD ~70% 증가(p<0.01). 병합 치료는 혈관신생 반응 완화.
본 연구는 지질 대사, 염증, 산화스트레스, 반점 조성, 신생혈관화를 지배하는 미특성화 miR-342-5p/Wnt3a 축을 밝혔습니다. AS 대동맥에서 miR-342-5p 상향은 Wnt3a 직접 억제로 β-카테닌 신호 약화, 취약 반점 표현형 촉진. 반대로 miR-342-5p 억제 또는 Wnt3a 복원은 보호적 지질 프로파일 재확립, 염증성 사이토카인 감소, 항산화 방어 강화, 반점 구조 안정화, 병적 혈관신생 억제.
이 결과는 대식세포 활성화와 염증에서 miR-342-5p 관여 보고, 혈관생물학에서 Wnt 신호 확립 역할과 일치. 본 연구에서 관찰된 AS 특징의 강력한 역전은 이 축 조절의 치료 잠재력 강조.
본 연구는 miR-342-5p가 Wnt3a 표적으로 반점 취약성과 혈관신생을 촉진함을 ApoE⁻/⁻ 마우스에서 최초 입증. miR-342-5p 약리적 억제 또는 Wnt3a 상향조절로 죽상경화 반점 안정화 가능, AS 치료 유망 전략 제시.
본 연구 생성 모든 데이터는 논문과 보충자료에 포함. 추가 문의는 교신저자 연락.
나노물질
초록 마이크로RNA(miRNA)가 뇌허혈/재관류 손상(CI/RI)에서 수행하는 역할에 대한 연구가 광범위하게 이루어졌지만, CI/RI에서 miR-326-5p의 구체적인 메커니즘은 여전히 불분명합니다. 따라서 이 연구는 CI/RI에서 miR-326-5p/신호 전달 및 전사 활성화 인자-3(STAT3) 축의 메커니즘을 규명하는 것을 목표로 했습니다. 원발 쥐 피질 신경세포에서의 산소-포도당 결핍(OGD) 모델과 Sprague-Dawley 쥐에서의 중대뇌동맥 폐색(MCAO) 모델을 각각 체외 및 체내에서 CI/RI를 모방하기 위해 확립했
요약 탄소 점(CDs)은 활성 표면 덕분에 항균제로 널리 사용되어 왔으나, 일부 CDs는 불안정성이라는 단점을 가지고 있습니다. 따라서 항균 활성 등의 관련 응용이 장기 사용에 신뢰성을 담보하기 어려웠습니다. 본 연구에서는 수열 합성 공정을 통해 청색 형광을 나타내는 CDs를 합성한 후, 폴리에틸렌이민(PEI)을 이용해 CDs를 CDs 기반 프레임워크(CDFs)로 조립했습니다. CDFs는 형광이 소광되었으나, 주사전자현미경(SEM)과 제타 전위 분석을 통해 더 안정적인 특성을 보임이 확인되었습니다. CDs와 CDFs 모두 그람음성균
