소라페닙 전달을 위한 뉴클레오사이드-지질 기반 나노운반체

초록

티로신 단백질 키나제의 작은 억제제인 소라페닙을 암 치료에 적용하는 것은 화학 요법의 전 세계적인 옵션으로 남아 있지만 이 약물의 낮은 수용해도(<5 μM), 독성 및 부작용 문제를 해결하기 위해서는 새로운 전략이 필요합니다. 이러한 맥락에서, 현재 이러한 단점을 극복하기 위해 나노캐리어의 사용이 연구되고 있다. 이 기여에서 우리는 하이브리드 뉴클레오사이드-지질에 의해 안정화된 새로운 유형의 소라페닙 기반 나노입자를 보고합니다. 고체 지질 나노입자(SLN)는 뉴클레오사이드-지질 전하에 따라 음수 또는 양수 제타 전위 값을 나타냈다. 소라페닙이 장착된 SLN의 투과 전자 현미경은 약 200nm의 평행 육면체 나노 입자를 나타냅니다. 간암과 유방암을 포함한 4가지 다른 세포주에 대한 생물학적 연구에서 소라페닙 기반 SLN의 항암 활성이 자유 약물에 비해 강화된 것으로 나타났습니다. 중요하게도, 소라페닙(> 80μM)에서 고농도의 SLN이 있는 상태에서 암세포를 배양한 후 기록된 대조 위상 현미경 이미지는 모든 경우에서 전체 암세포 사멸을 보여주었습니다. 이러한 결과는 약물 전달 시스템으로서 뉴클레오사이드 지질 기반 SLN의 잠재력을 강조합니다.

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배경

Nexavar™라는 이름으로 상용화된 소라페닙은 소수성 약물 키나제 억제제[1]로 진행성 신세포암(RCC)[2], 간세포암(HCC)[3], 진행성 갑상선을 포함한 다양한 인간 암의 치료에 승인되었습니다. 암종. 소라페닙은 막횡단 수용체, 세포내 티로신 및 세린-트레오닌 키나제를 포함하여 여러 알려진 단백질 키나제 표적을 갖고 있으며 또한 세포자멸사를 유도하는 것으로 나타났습니다. 작용 기전 측면에서 소라페닙은 다중 표적을 통해 종양 성장을 억제하고 종양 및/또는 종양 혈관신생에 직접 작용하는 것으로 보고되었습니다(VEGFR 및 PDGFR 신호 전달 억제를 통해)[4, 5]. 악성 세포 성장을 억제하는 효능은 흑색종[6], 갑상선[7], 췌장[5], 간세포 암종 및 백혈병[8]과 같은 많은 조직학적 암 유형에서 입증되었습니다. 그러나 낮은 수용해도, 독성 및 부작용으로 인해 많은 임상 적용에서 소라페닙의 사용이 제한됩니다. 이러한 문제를 해결하기 위해 액정 나노입자[11], 나노에멀젼[12], 시클로덱스트린 변형 다공성 실리콘 나노입자[13], 약물 용출 나노복합체[14], 고분자 전해질을 포함한 여러 소라페닙 제형[9, 10]이 현재 조사 중입니다. 기반 나노입자[15], 또는 커큐민 자기조립 나노입자[16]. 그러나 소라페닙이 함유된 지질 나노입자(LN)는 제대로 조사되지 않았습니다[17, 18].

여기에서 우리는 뉴클레오사이드 지질[20,21,22]에 의해 안정화된 소라페닙 기반 고체 지질 나노입자(SLN)[19]의 첫 번째 예를 보고합니다. 양전하 및 음전하를 띤 핵지질에 대한 크로마토그래피 연구(DOTAU 및 diC₁₆ dT)는 이러한 양친매성이 약물 전달 응용의 틀 내에서 사용하기 위해 요구되는 안정성과 순도를 가지고 있음을 나타냅니다[23, 24]. 간단한 나노침전 절차를 통해 양성(SLN⁺ ) 또는 음전하(SLN⁻ ) (그림 1). 조사된 모든 SLN이 다양한 인간 암종에 대한 소라페닙의 세포독성 효과를 향상시켰으며, 이는 SLN이 수용해도 및 항암 활성 측면에서 소라페닙의 한계를 극복할 수 있음을 보여줍니다.

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SLN 공식화 계획. 음이온성 뉴클레오티드 지질, 티미딘 3'-(1,2-디팔미토일-sn의 화학 구조 -글리세로-3-인산) (diC₁₆ dT), 양이온성-뉴클레오사이드-지질 DOTAU(2',3'-디올레일-5'-데옥시-5'-트리메틸-암모늄-우리딘) 및 이 연구에서 사용된 소라페닙(왼쪽). 핵지질(diC₁₆)의 나노침전 후 얻은 평행육면체 모양의 SLN의 개략도 dT 또는 DOTAU, SLN⁻ 으로 연결 및 SLN⁺ , 각각) 소라페닙(오른쪽). 개략도는 DOTAU 소라페닙이 장착된 나노입자(삽입, 막대 500nm)를 보여주는 투과 전자 현미경(TEM) 이미지에서 조정되었습니다.

방법

화학물질 및 시약

메탄올(MeOH), 포름산(FA) 및 포름산암모늄(AFNH₄ )는 VWR Chemicals(프랑스)에서 구입했으며 모두 HPLC(고성능 액체 크로마토그래피) 등급이었습니다. HPLC 등급수(최소 저항 18.2MΩ)는 ELGA Millipore 시스템(프랑스)에 의해 사내에서 생산되었습니다. DOTAU(CAS 번호:868226-06-6) 및 diC₁₆ dT(CAS 번호:1160002-70-9)는 참고 문헌[23,24,25]에 보고된 프로토콜에 따라 실험실에서 합성되었습니다. 소라페닙, 4-[4-[[4-클로로-3-(트리플루오로메틸)페닐]카르바모일-라미노]페녹시]-N -메틸-피리딘-2-카르복사미드(CAS 번호:284461-73-0)는 SynVec http://synvec.fr(Ref# D114250414)에서 구입했습니다.

크로마토그래피 연구

역상 UHPLC(초고성능 액체 크로마토그래피) 방법이 핵지질(DOTAU 및 diC₁₆)에 대해 개발되었습니다. dT) 및 SLN에서의 소라페닙 정량. HPLC에 주입하기 전에 나노입자 수용액을 에탄올로 5배와 10배 희석하여 핵지질과 소라페닙을 각각 정량화했습니다.

컬럼 선택을 위한 4차 밸브 시스템이 있는 펌프, 온도 조절 자동 샘플러 및 온도 조절 컬럼 구획으로 구성된 Dionex-Thermo Scientific(USA)의 크로마토그래피 시스템 UHPLC UltiMate 3000을 사용했습니다. 분리는 Syncronis C18 50 × 2.1mm, 1.7μm 컬럼으로 수행되었습니다. 이동상은 70/30 MeOH/25mM 암모늄 아세테이트(pH =7.4)(A) 및 MeOH(pH =7.9) 중 26.5mM 암모늄 아세테이트(B)로 구성되었습니다. 0.2mL/min의 유속이 사용되었으며 기울기 프로파일은 0~2분, 0~100% B입니다. 2~20분, 100% B. 컬럼 온도는 25°C로 설정되었습니다. 소라페닙 및 diC₁₆에 대해 267nm에서 검출을 수행했습니다. DOTAU의 경우 dT 및 257nm입니다. 주입된 부피는 1μL로 소라페닙의 경우 0.6ng, 핵지질과 DOTAU 및 diC₁₆ 모두에 대해 15ng의 정량 한계로 이어졌습니다. dT.

소라페닙, DOTAU 및 diC₁₆에 대한 표준 곡선 에탄올의 dT는 추가 파일 1:각각 그림 SI1, SI2, SI3에 나와 있습니다.

소라페닙 나노입자의 제조

10mg의 소라페닙을 1mL의 에탄올 및 10mg의 NL(diC₁₆ dT 또는 DOTAU)는 1mL의 에탄올에 용해되었습니다. NL 100μL, 소라페닙 용액 100μL, 에탄올 800μL를 실온에서 함께 혼합하고 자기 교반하에 증류수 10mL에 적가했습니다. 용액을 25°C에서 90분 동안 초음파 수조에 넣었습니다. 에탄올을 30°C에서 진공 하에 제거하고 부피를 1mL로 조정했습니다. 이 용액을 5초마다 2초의 펄스로 100% 진폭에서 10분 동안 6mm(Vibracell 75186)의 초음파 프로브를 사용하여 두 번 초음파 처리했습니다. 1ml를 30mL의 증류수에 대해 3 × 15분 동안 투석했습니다. 이 부피는 2mL로 조정되고 특성화 정량화 및 안정성 연구를 위해 보존됩니다. 또한, 대조군 실험은 핵지질이 없는 동일한 프로토콜로 실현되었습니다.

투과 전자 현미경(TEM 및 EDX)

나노 입자는 음성 염색 현미경으로 시각화했습니다. 10 마이크로리터의 나노입자를 10분 동안 탄소 코팅된 구리 그리드로 옮겼습니다. 그런 다음 샘플을 건조하고 2.5%(w /와 ) 2분 동안 물에 아세트산 우라닐 시편은 Hitachi H 7650 전자현미경으로 관찰하였다. 에너지 분산 X선 분광기는 Quantax-X-Flash SVE 6과 결합된 TECNAI 투과 전자 현미경을 사용하여 수행되었습니다.

입자 크기 및 제타 측정

입자 제타 및 크기는 Zetasizer NanoZS, Malvern을 사용하여 결정되었습니다. 실험은 400μL의 물에 희석된 40μL의 나노 입자로 실현되었으며 측정은 25°C에서 수행되었습니다.

세포독성 분석

HuH7 및 HepG2는 10% 소태아 혈청이 보충된 DMEM-Glutamax에서 단층으로 성장되었다. MDA-MB-134 및 T-47D는 10% 송아지 태아 혈청(T-47D 전용, 비필수 AA 1X, 포도당 0.45%, 인슐린 10mg L⁻¹ 의 경우)이 보충된 RPMI에서 단층으로 성장했습니다. , 및 피루브산나트륨 1X). 모든 배양 시약은 Invitrogen에서 구입했습니다. 10⁴ 90μL의 완전한 배양 배지에 있는 세포/웰을 96웰 플레이트에 플레이팅하고 37°C 및 5% CO2에서 24시간 동안 배양했습니다.₂ , 배양 배지에 10μL의 SLN 또는 소라페닙을 추가하기 전에 소라페닙(CAS 번호:284461-73-0)을 0.1% DMSO가 포함된 배양 배지에 용해시켰다. 이러한 조건에서 침전 없는 소라페닙의 최대 농도는 5μM인 반면, 소라페닙이 로드된 SLN의 경우 테스트된 최대 농도는 DMSO 없이 120μM였습니다. 인큐베이션 4일 후, 시약 용액 웰당 20μL를 첨가하여 포르마잔 기반 증식 분석(CellTiter 96® Aqueous One Solution Cell Proliferation Assay 키트, Promega)으로 세포 생존율을 평가했습니다. 37°C, 5% CO₂에서 30분 배양 후 , 각 웰의 흡광도는 Berthold 분광광도계를 사용하여 492nm의 파장에서 측정되었습니다. 결과는 퍼센트로 표시됩니다. {492}\ \mathrm{of}\ \mathrm{공백}}{\ {\mathrm{OD}}_{492}\mathrm{of}\ \mathrm{미처리}\ \mathrm{cells}-{\mathrm {OD}}_{492}\ \mathrm{of}\ \mathrm{공백}} \).

세포 생존 연구

HuH7은 이전에 "세포독성 분석" 섹션에 설명된 대로 성장되었습니다. 세포 생존 능력은 SLN⁺ 과 함께 인큐베이션 4일 후에 수행되었습니다. 살아있는/죽은 세포 생존 분석(Invitrogen)을 사용하여 다양한 농도(0, 1, 5, 10, 25, 50, 100μM)에서 소라페닙을 로드했습니다. 간단히 말해서, 배양 배지를 제거하고 부착된 세포를 Hanks의 균형 염 용액(HBSS)으로 한 번 세척했습니다. 2μM 칼세인 아세톡시메틸 에스테르와 4μM 에티듐 호모다이머-1을 포함하는 HBSS 200마이크로리터를 각 웰에 첨가하고 37°C 및 5% CO2에서 45분 동안 배양했습니다. . 염색 후, 세포를 HBSS로 1회 세척하고 도립 형광 현미경으로 현미경으로 이미지화하였다. 죽은 세포의 백분율은 형광 활성화 세포 분류(FACS) 분석에 의해 평가되었습니다. 4μM의 ethidium homodimer-1 용액으로 염색한 후 세포를 트립신으로 처리하고 1000rpm에서 5분 동안 원심분리하여 PBS(phosphate-buffered saline)로 두 번 세척했습니다. Becton Dickinson의 LSRFortessa 유세포 분석기에서 데이터를 수집하고 DIVA 소프트웨어를 사용하여 결과를 분석했습니다. 70% 메탄올을 사용하여 죽은 세포 샘플을 준비하고 대조군으로 사용했습니다.

결과 및 토론

SLN의 합성 및 특성화

핵지질의 비독성 및 자가 조립 특성은 소라페닙과 같은 소수성 약물을 캡슐화하기 위한 이상적인 양친매성 보조제를 제공합니다. 이 연구에서는 소라페닙의 낮은 수용해도 특성을 해결하고 항암 활성을 향상시키기 위해 간단한 나노침전 절차가 개발되어 많은 경우 임상적 사용이 제한됩니다. 수용성과 관련하여 우리는 소라페닙의 소수성 특성, 헤테로고리 및 수소 결합 기능이 핵지질과의 상호 작용 및 나노 물체의 형성에 유리할 것이라고 가정했습니다. 또한, 소라페닙이 로딩된 SLN은 소라페닙의 세포 흡수를 증가시켜 항종양 활성을 증가시킬 것으로 예상되었다. 실제로, 시스플라틴 나노입자에 대해 달성한 이전 연구 중 하나에서 시스플라틴의 항종양 활성 향상은 암세포에 내재화되는 약물의 양이 증가하기 때문임을 입증했습니다[23] [1]. 우리의 나노침전 과정은 3단계를 포함합니다:(i) 40°C에서 에탄올에 소라페닙의 가용화(10mg/mL의 소라페닙, 100μL) 및 1당량의 핵지질(음이온성 뉴클레오티드-지질, diC₁₆ -3'-dT [티미딘 3'-(1,2-디팔미토일-sn) -글리세로-3-포스페이트)] 또는 양이온성 뉴클레오시드-지질 DOTAU [23][2',3'-디올레일-5' -데옥시-5'-트리메틸-암모늄-우리딘], 에탄올 중 10mg/mL 용액 100μL; (ii) 에탄올 용액 1mL를 실온에서 증류수 10mL에 적가합니다. (iii) 생성된 현탁액을 증발시켜 과량의 에탄올을 제거하고 초음파 처리했습니다.

크로마토그래피 연구

새로운 제형의 약물 로딩 능력을 평가하기 위해 역상 UHPLC 방법이 개발되었습니다. 이 HPLC 방법을 사용하여 12분 만에 소라페닙과 핵지질을 동시에 분리하여 SLN의 화합물을 개별적으로 정량화할 수 있었습니다(추가 파일 1:그림 SI1–4).

소라페닙/DOTAU(SLN⁺ )로 구성된 제형에 대해 50 및 80%의 로딩 비율(나노입자 내 소라페닙/핵지질의 질량비) 및 약 55 및 75%의 소라페닙 캡슐화 수율이 얻어졌습니다. ) 및 소라페닙/diC₁₆ dT(SLN⁻ ), 각각. 핵지질의 부재하에 수행된 대조군 실험 동안, 제형의 상이한 단계 동안 약 90%의 소라페닙이 손실되었는데 이는 아마도 물에 대한 소라페닙의 낮은 용해도 때문일 것이다. 이 결과는 소라페닙을 가용화하고 SLN을 안정화하기 위해 핵지질이 필요함을 보여줍니다.

이화학적 연구

동적 광산란(DLS) 실험은 SLN의 형성을 특성화하기 위해 수행되었습니다. 음성 및 양성 핵지질 모두(diC₁₆ dT 및 DOTAU)는 단분산성(다분산성 지수, PDI =0.202 및 0.289, 크기 =각각 335.2 및 304.4nm, 그림 2 및 추가 파일 1:그림 SI7)을 갖는 수용액에서 평행육면체 모양의 유사한 비구형 나노입자를 형성합니다. 예상대로 SLN 기반 물체의 제타 전위는 핵지질 극성 머리(ζ =+ 59.1 및 − 54.9mV(SLN⁺ ) 및 SLN⁻ , 추가 파일 1:그림 SI10 참조). NP에서 소라페닙의 존재는 TEM 이미징에 의해 검증되었고 SLN-의 EDX 획득은 EDX 획득으로 실현되었습니다. 그림 2e, f는 I 및 II 스팟을 보여줍니다. 그림 2f의 스폿 I은 소라페닙의 존재를 나타내는 염소 원자(스팟 I, 그림 2e, f)의 방출을 나타냅니다(화학 구조 그림 2f 참조). 염소는 스팟 I에만 존재하고 스팟 II에는 존재하지 않습니다(그림 2f).

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SLN 특성화. DOTAU를 사용한 소라페닙 나노입자의 형태를 보여주는 투과전자현미경(TEM) 이미지(a ) 및 삽입(b ). DLS(d ). ㄷ diC₁₆을 보여주는 TEM 이미지의 예 dT-SLN(각각 330 x 500 nm 화살표). (이 ) SLN-의 TEM 이미지. I 및 II 지점은 EDX 획득이 수행된 지역화입니다. (f ) I &II 위치에서 EDX 스펙트럼. 파선은 I에만 존재하는 염소 원자의 방출을 강조했습니다. 소라페닙 분자의 화학 구조도 제시됩니다. 두 스펙트럼 모두 8 keV에서 Cu 원자 방출로 정규화되었습니다(TEM Cu 그리드로 인해)

중요하게도, 대조군 실험에서 핵지질이 없는 소라페닙의 나노침전은 어떤 나노 물체도 생성하지 않았으며, 이는 핵지질이 SLN의 형성 및 안정화를 허용한다는 것을 보여줍니다.

안정성 연구

SLN⁺ 의 콜로이드 안정성 및 SLN⁻ 두 온도에서 DLS 및 제타 전위로 측정되었습니다(그림 3a 및 추가 파일 1:그림 SI10). diC₁₆의 경우 dT 기반 공식, SLN⁻ 크기 4°C와 37°C 모두에서 30일 후에 수정되지 않았으며 이는 나노입자의 높은 안정성을 나타냅니다(추가 파일 1:그림 SI9). 이러한 안정성은 상호작용의 특성으로 설명될 수 있습니다(H-결합 포함, π -π 스태킹, 전하/전하 상호작용) diC₁₆ 사이에서 발생 dT와 소라페닙. 그러나 DOTAU 기반 공식의 경우 SLN⁺ DLS 연구에서 밝혀진 바와 같이 4°C에서만 30일 동안 안정한 반면(그림 3a), 37°C에서는 크기와 PDI 모두의 증가가 관찰되었습니다(그림 3a). SLN⁺ 의 경우 37°C에서 관찰된 이 상대적 불안정성 이는 소라페닙과 DOTAU의 양전하 사이에서 발생하는 반발 쿨롱 상호작용으로 설명될 수 있습니다. 흥미롭게도, 콜로이드 안정성 연구는 SLN의 안정화에 사용되는 핵지질에 따라 안정성을 조절하여 SLN에서 생리학적 환경으로 소라페닙의 전달을 조절할 수 있음을 나타냅니다. 안정성 조절은 필요한 방출 속도에 따라 매력적일 수 있습니다.

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SLN의 안정성 연구. SLN⁺ 의 콜로이드 안정성 (아 ) 및 SLN에서 소라페닙 및 DOTAU의 화학적 안정성⁺ 4°C 및 37°C에서 시간 대비(b ). PDI, 다분산 지수

콜로이드 안정성과 병행하여 소라페닙, DOTAU 및 diC₁₆의 화학적 안정성 SLN 기반 제형의 dT는 새로운 크로마토그래피 방법을 사용하여 4°C 및 37°C에서 시간의 함수로 조사되었습니다(추가 파일 1:그림 SI4 참조). 두 온도에서의 운동 연구는 그림 3b와 추가 파일 1:DOTAU-SLN 및 diC₁₆에 대한 SI5에 나와 있습니다. 각각 dT-SLN. 결과는 소라페닙과 diC₁₆ 제형의 dT 분자는 최소 1개월 동안 안정적으로 유지되며, 이는 SLN^- 의 경우 두 온도 모두에서 장기적인 화학적 안정성을 나타냅니다. . 그러나 SLN⁺ 에서 시간 동안 DOTAU의 감소가 관찰되었습니다. 제형. 먼저 4°C에서 7일 동안 약 12%, 30일 동안 약 20%의 손실이 측정되었습니다. 온도를 높이면 DOTAU 안정성이 37°C에서 7일 동안 55%, 30일 동안 95%까지 감소했습니다. 이러한 핵지질 간의 화학적 안정성 차이는 이전 안정성 연구에서 이미 입증되었습니다(추가 파일 1:그림 SI6 참조).

생물학 연구

SLN 세포독성은 세포의 대사활성과 형태로 평가하였다. MTT 분석을 통해 2개의 간암종(HuH7 및 HepG2)과 2개의 관강 유방암(MDA-MB-134 및 T-형)을 포함한 4개의 세포주에서 유리 소라페닙(DMSO의 0.1%)과 약물이 로드된 SLN(그림 4)을 비교할 수 있었습니다. 47D). 첫째, 유리 소라페닙의 최대 용해도에 가까운 농도에서(DMSO의 0.1%에서 소라페닙 5μM, 소라페닙/DOTAU의 경우 2.8μM, 소라페닙/diC의 경우 4μM₁₆) dT 나노 입자), 두 SLN 모두 유리 소라페닙보다 세포 생존력을 더 잘 억제했습니다. 그림 4b에서 볼 수 있듯이 MDA-MB-134 세포에 대해 실현된 세포 생존력 연구는 유리 소라페닙의 활성이 수용성([sorafenib]에서 세포 생존율의 100% =5 μM)에 의해 제한되는 반면 IC<하위>50 SLN⁺ 에서 15 및 50μM 값이 관찰되었습니다. 및 SLN⁻ , 각각(그림 4b). HuH7에 대한 FACS 연구에서 IC₅₀ 약 50μM의 값을 얻었습니다(추가 파일 1:그림 SI12 및 SI13). 위상차 현미경의 이미지는 실제로 SLN^- 으로 처리된 세포층의 감소된 밀도를 보여줍니다. 및 SLN⁺ 세포 형태의 변화가 없는 미처리 또는 소라페닙 처리 세포와 비교(추가 파일 1:그림 SI11). 둘째, 유사한 실험이 더 높은 농도의 SLN에서 실현되었습니다([sorafenib] =120 및 SLN의 경우 84μM^- 및 SLN⁺ , 각각) 용해도 한계(농도 5μM)에서 유리 소라페닙과 비교했습니다. 이러한 조건에서 두 SLN은 그림 5와 같이 4개의 암세포주에 대해 강력한 세포독성 효과를 나타냅니다. 위상차 현미경 이미지에서 알 수 있듯이 두 SLN^- 에서 세포 파편이 관찰되었습니다. (그림 5C1–4) 및 SLN⁺ (그림 5D1-4) 세포 사멸을 증명하는 반면 유리 소라페닙의 경우 세포가 살아 있습니다 (그림 5B1-4). 내강 B 유방암 세포의 경우 두 SLN에 대한 강력한 세포 독성 효과가 관찰되었다는 점은 주목할 가치가 있습니다(그림 5C1-2 및 D1-2). 이전에는 보고되지 않았던 이러한 항종양 효과는 SLN 덕분에 소라페닙의 새로운 치료 가능성을 열어줍니다.

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소라페닙 또는 SLN의 세포독성 효과. 아 ) 5μM의 유리 Sorafenib, 2.8μM의 NPs Sorafenib/DOTAU(SLN)에서 3개의 웰에 대한 MTS 분석으로 정량화한 후 4개의 세포주(2개의 관강 B 유방암 및 2개의 간암종)에서 유리 Sorafenib 또는 Sorafenib의 SLN과의 세포독성 비교 ) 및 4 μM의 NP Sorafenib/diC16dT(SLN-). ㄴ ) 유리 소라페닙(가용성 제한), SLN+(회색) 또는 SLN-(검정색) 존재 시 세포 생존율 분석(MDA-MB-134 세포)

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대조군, 유리 소라페닙 또는 SLN 간의 세포 형태 비교. 4개의 인간 암종 세포주(간암종, HuH7, HepG2 및 관강 유방 암종 MDA-MB-134, T-47D)에 대해 서로 다른 조건에서 세포독성을 보여주는 위상차 현미경 이미지. A) 소라페닙이 없는 경우(대조군 실험, A1 –A4 MDA-MB-134, T-47D, HuH7, HepG2, 세포주에 대해 각각). B) 세포를 5μM의 유리 소라페닙의 존재 하에 4일 동안 인큐베이션했습니다. C 및 D) SLN^- 의 존재 하에 배양된 세포 및 SLN⁺ 소라페닙 농도가 각각 84 및 120μM일 때

결론

우리는 소라페닙의 효율적인 캡슐화 및 전달을 허용하는 핵지질에 기반한 새로운 접근 방식을 보고합니다. 우리의 조사는 소라페닙이 많이 함유된 두 가지 유형의 고체 지질 나노입자(SLN)의 형성을 보여줍니다. 음 또는 양의 제타 전위 값을 나타내는 이러한 SLN은 평행 육면체 모양을 특징으로 합니다. DLS 및 HPLC 연구에 의해 밝혀진 바와 같이, SLN의 안정성은 사용된 핵지질에 따라 조절될 수 있습니다. 중요한 것은 두 SLN⁺ 및 SLN⁻ 제형은 소라페닙의 수용해도를 극적으로 향상시킬 수 있습니다(120μM 이상의 농도). 이러한 SLN은 물에 대한 용해도가 부족하여 제한적인 유리 소라페닙에 비해 4가지 암 세포주(간암 및 유방암)에서 더 나은 항종양 활성을 나타냅니다. 4개의 암세포주에 대해 기록된 대조상 현미경 이미지는 120μM의 SLN^- 과 함께 배양할 때 급격한 세포 사멸을 나타냅니다. 또는 84μM의 SLN⁺ . 따라서 이 약물은 간암(예:동맥 내 화학 요법에서 소라페닙 사용) 또는 유방암의 경우 새로운 치료 옵션으로 사용할 수 있습니다. 우리가 아는 한, 이 보고서는 SLN 접근법의 유용성을 입증하는 내강 B 유방암에 대해 소라페닙을 사용한 연구의 첫 번째 예입니다. 전체적으로, 이 기여에서 보고된 결과는 약물 전달 시스템으로서 뉴클레오사이드-지질 기반 SLN의 잠재력을 강조합니다.

약어

AFNH₄ :: 포름산암모늄
DLS:: 동적 광산란
FA:: 개미산
HCC:: 간세포 암종
HPLC:: 고성능 액체 크로마토그래피
LN:: 지질 나노입자
MeOH:: 메탄올
PDI:: 다분산 지수
RCC:: 신장 세포 암종
SLN:: 고체 지질 나노입자
UHPLC:: 초고성능 액체 크로마토그래피

Pt/Nd:SrTiO3 접합에서 다단계 저항 스위칭 메모리 및 메모리 상태 종속 광전압에 관한 연구 초고감도 포도당 감지를 위한 메조포러스 산화니켈(NiO) 나노페탈

나노물질